Hình 4.1: Kết quả chạy điện di của mẫu protein Giếng 1: Thang chuẩn
Giếng 2: Peak 2 Giếng 3: Peak 3 Giếng 4: Enzyme thô
Giếng 5: Enzyme của hãng Amano
Vì hoạt tính peak 1 quá thấp nên ta không xác định trọng lượng phân tử của protein enzyme của peak 1. Ta chỉ quan tâm tới peak 2 và peak 3
60
Bảng 4.9:Giá trị Rf và trọng lượng phân tử protein trong thang chuẩn
Rf Trọng lượng phân tử (Dalton) Log ( trọng lượng phân tử)
0,147 150000 5,176 0,258 100000 5,00 0,276 75000 4,875 0,345 50000 4,699 0,414 35000 4,544 0,552 25000 4,398 0,621 15000 4,176
Đồ thị 4.7: Sự tương quan giữa log của trọng lượng phân tử và giá trị Rf Phương trình tuyến tính thu được
Y = -2.0597x + 5.4641
Trong đó: y=log (trọng lượng phân tử protein)
X=Rf Tỷ số khoảng cách di chuyển của protein và khoảng cách di chuyển của vạch màu bromophenol blue cuối cùng tính từ gel phân tích
0.621, 4.176 y = -2.0597x + 5.4641 R² = 0.9756 0.000 1.000 2.000 3.000 4.000 5.000 6.000 0.000 0.200 0.400 0.600 0.800 lo g M w Rf
61
Từ phương trình tuyến tính, có thể suy ra công thức tính trọng lượng phân tử của protein
Trọng lượng phân tử protein = 10y
Giá trị Rf từng vạch của mỗi ba peak và trong mẫu thô
Bảng 4.10: Giá trị Rf từng vạch của của mỗi peak trong mẫu
Vạch Peak 2 Peak 3 Mẫu thô Hãng Amano
1 0,155 0,158 0,138 0,138
2 0,224 0,379 0,19 0,259
3 0,259 Không có 0,224 Không có
4 Không có Không có 0,276 Không có
5 Không có Không có 0,448 Không có
Bảng 4.11: Giá trị Rf và trọng lượng phân tử protein ở Hãng Amano
Thứ tự vạch X=Rf Y Trọng lượng phân tử protein (Daltons) Vạch 1 0,139 5,178 150660
Vạch 2 0,259 4,931 85310
Dựa vào bảng 4.10 ta thấy trọng lượng phân tử protein của hãng Amano nằm trong khoảng 85310-150660 Daltons
Bảng 4.12: Giá trị Rf và trọng lượng phân tử protein ở Peak 2
Thứ tự vạch X=Rf Y Trọng lượng phân tử protein (Daltons) Vạch 1 0,155 5,145 139636
Vạch 2 0,224 5,003 100693 Vạch 3 0,259 4,931 85310 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
62
Bảng 4.13: Giá trị Rf và trọng lượng phân tử protein ở Peak 3
Thứ tự vạch X=Rf Y Trọng lượng phân tử protein (Daltons) Vạch 1 0,158 5,139 137720
Vạch 2 0,397 4,646 44258
Dựa vào các bảng trọng lượng phân tử của từng peak ta có thể kết luận được trọng lượng phân tử protein nằm trong khoảng 44258 – 139636 Daltons
Bảng 4.14: Giá trị Rf và trọng lượng phân tử protein ở mẫu thô
Thứ tự vạch X=Rf Y Trọng lượng phân tử protein (Daltons) Vạch 1 0,138 5,180 151356
Vạch 2 0,19 5,073 118304 Vạch 3 0,224 5,003 100693 Vạch 4 0,276 4,896 78704 Vạch 5 0,448 4,541 34753
Trọng lượng phân tử protein của mẫu thô nằm trong khoảng 34753-151356 Daltons
Nhận xét:
Ta có thể so sánh trọng lượng phân tử protein của mẫu enzyme trước và sau khi tinh sạch
Dựa vào hình 4.1: Mẫu enzyme thô có chứa nhiều vạch và có màu đậm, do trong mẫu có chứa protein tạp vì vậy trong giếng của mẫu enzyme thô có nhiều vạch ảnh hưởng đến enzyme
Vì vậy khi xác định trọng lượng phân tử của protein ta nên xác định bằng mẫu protein đã được tinh sạch vì nó không chứa nhiều protein tạp không ảnh hưởng nhiều đến trọng lượng phân tử của protein mà ta quan tâm
63