ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3.4.Định lượng lipid theo phương pháp tách chiết bằng Ethepetrolium [6].
Ethepetrolium. [6].
* Nguyên tắc:
Dựa vào tính hoà tan của lipid trong dung môi hữu cơ (ete, benzen, chloroform…) để chiết rút lipid ra khỏi mẫu.
* Tiến hành:
Cân 0,05g mẫu đã sấy khô tuyệt đối, nghiền nhỏ cho vào tube để chiết. Cho 1,5ml Ethepetrolium, lắc đều trên máy vontex 15 phút. Tiến hành chiết 3 lần.
- Chiết lần 1: Mẫu cho vào 3 tube, đổ dung môi hữu cơ theo qui định. Để vào tủ lạnh ở nhiệt độ 40C trong 24 giờ, sau đó ly tâm ở tốc độ 12000 vòng /phút, loại bỏ dịch.
- Chiết lần 2: Cho Ethepetrolium vào theo mức quy định. Để vào tủ lạnh ở nhiệt độ 40
C trong 24 giờ, sau đó ly tâm ở tốc độ 12000 vòng /phút, loại bỏ dịch.
33
- Chiết lần 3: Cho Ethepetrolium vào theo mức quy định. Để vào tủ lạnh ở nhiệt độ 40C trong 24 giờ, sau đó ly tâm ở tốc độ 12000 vòng /phút, loại bỏ dịch.
Lấy vài giọt dịch chiết lên lam kính và hơ nhẹ cho Ethepetrolium bay hơi hết. Soi lên, nếu lam kính trong suốt chứng tỏ lipid trong mẫu đã chiết hết. Lấy các tube đã chiết cho vào sấy khô ở nhiệt độ 1050C cho tới khi cân thấy khối lượng không đổi. Xác định khối lượng tube + mẫu đã chiết rút lipid ở độ khô tuyệt đối.
* Tính kết quả:
Kết quả tính theo công thức: X =
GGc Gc Gm
x100 Trong đó:
X: Hàm lượng lipid có trong nguyên liệu ở độ khô tuyệt đối (%) Gm: Khối lượng tube + mẫu ban đầu
Gc: Khối lượng tube + mẫu sau khi đã chiết rút lipid ở độ khô tuyệt đối (g).
G: Khối lượng mẫu đem phân tích (g)