2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.5Khảo sát các điều kiện môi trƣờng ảnh hƣởng đến khả năng phát triển và sinh laccase của chủng FNA
triển và sinh laccase của chủng FNA1
Ảnh hưởng của nhiệt độ, pH môi trường nuôi cấy, nồng độ NaCl
Để nghiên cứu ảnh hƣởng của pH, nhiệt độ, nồng độ muối NaCl lên khả năng sinh trƣởng và sinh laccase của nấm sợi, môi trƣờng Czapek nghèo với pH 2-9, nhiệt độ là 28, 30, 37 và 420C, nồng độ NaCl là 0; 0,1; 1; 5; 10% đã lần lƣợt đƣợc sử dụng. Sau 5 ngày nuôi cấy đánh giá khả năng sinh trƣởng thông qua quan sát và khối lƣợng khô sinh khối nấm. Mẫu dịch lên men đƣợc sử dụng để đo hoạt tính enzyme.
Ảnh hưởng của nồng độ DDT và nồng độ glucose
Để nghiên cứu khả năng phát triển của nấm sợi ở các nồng độ DDT khác nhau, môi trƣờng Czapek chứa DDT với nồng độ 50; 100; 200; 300 ppm đã đƣợc sử dụng. Ngoài nguồn carbon là DDT còn một điều kiện nữa cũng ảnh hƣởng rất lớn đến sự phát triển của nấm là nồng độ đƣờng. Thông qua thí nghiệm này có thể xác định nấm sợi đƣợc chọn để nghiên cứu chuyển hóa DDT có theo cơ chế nào, đồng trao đổi chất hay không thuộc dạng này. Đƣờng glucose đƣợc sử dụng với các nồng độ lần lƣợt là 0; 0,1; 0,5; 1; 2; 3%, môi trƣờng nuôi cấy có bổ sung 100 ppm DDT.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
50
Ảnh hưởng của các chất cảm ứng
Các chất cảm ứng sinh laccase đƣợc sử dụng là guiaiacol, veratyl alcohol, CuSO4. Để nghiên cứu khả năng phát triển và sinh laccase trên môi trƣờng chứa các chất ô nhiễm khác nhau, các cảm ứng sinh enzyme là các chất độc khác cũng đƣợc sử dụng nhƣ dịch chiết (dịch chiết từ đất ô nhiễm có chứa 2,3,7,8 TCDD – phụ lục 7); 2,4-D; 2,4,5-T; PAH ( các đại diện là pyren, phenanthren, anthracene) với nồng độ 100 ppm.
Ảnh hưởng của chất hoạt động bề mặt
Chất hoạt động bề mặt đƣợc sử dụng là tween 80 với nồng độ 0,2% và nƣớc chiết bồ kết với nồng độ 0,5% ( từ dịch chiết 20g quả bồ kết trong 100 ml nƣớc cất). Hoạt tính enzyme đƣợc xác định theo từng ngày nuôi cấy.
Ảnh hưởng của nguồn carbon, nitơ và môi trường thay thế
Để nghiên cứu ảnh hƣớng của các nguồn carbon và nitơ khác nhau, chủng nghiên cứu đƣợc nuôi trong môi trƣờng Czapek nghèo với thành phần carbon trong môi trƣờng (saccharose) đƣợc thay thế bằng glucose, lactose, tinh bột, cellulose và cao malt, nguồn nitơ NaNO3 và KNO3 đƣợc thay thế bằng NH4NO3, urê, cao men, cao thịt, bột đậu tƣơng. Môi trƣờng thay thể đƣợc khảo sát bằng các môi trƣờng MEG (cao malt), YS (cao men), SG (bột đậu tƣơng) và PG (khoai tây).