4. Ý nghĩa của đề tài
2.2.2.1. Nuôi cấy chủng nấm mốc để thử hoạt tính
Các chủng nấm tuyển chọn được nuôi cấy trải dày trên môi trường giữ giống trong đĩa petri, nuôi trong tủ ấm từ 36 đến 48 giờ.
Xác định hoạt tính enzyme bằng phương pháp cấy chấm điểm
Định tính cellulase bằng phương pháp cấy chấm điểm. Dùng que cấy lấy một ít chủng nuôi cấy trong môi trường thạch nghiêng. Sau đó cấy chấm một điểm vào môi trường thạch đĩa chứa 1% cơ chất CMC, môi trường tủ ấm 3 đến 4 ngày. Hiện hình vòng phân giải bằng thuốc thử liugon đỏ 1 %. Hoạt tính enzyme được xác định bằng hiệu số (D-d) cm.
Trong đó D: là đường kính vòng phân giải d: là đường kính khuẩn lạc.
Xác đinh hoạt tính enzyme bằng phương pháp khuếch tán trên môi trường thạch (William, 1983)
Dùng khoan nút chai khoan một lỗ trên môi trường thử hoạt tính. Nhỏ vào mỗi lỗ khoan một ml dung dịch enzyme đã chuẩn bị sẵn, để tủ lạnh 6-8 giờ cho enzyme khuếch tán vào môi trường thạch, sau đó cho vào tủ ấm 300
C trong 24 giờ. Hiện hình vòng phân giải bằng thuốc thử liugon đỏ 1%. Hoạt tính enzyme được xác định bằng hiệu số (D-d) cm.
Trong đó D: là đường kính vòng phân giải d: là đường kính lỗ đục.
SVTH: Nguyễn Thị Dung 30 K35B – SP Sinh
Nghiên cứu ảnh hưởng của yếu tố môi trường đến hoạt tính của cellulase
Ảnh hưởng của nhiệt độ lên hoạt tính của cellulase
Cho dịch cellulase và dung dịch 1% CMC phản ứng với nhau ở các nhiệt độ khác nhau từ 25 đến 400C trong 30 giờ. Hoạt tính cellulase của các dung dịch được xác định theo phương pháp khuếch tán trên môi trường thạch.
Ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy
Cho dung dịch cellulase và dung dịch 1% CMC phản ứng với nhau ở các mức thời gian khác nhau từ 12 đến 48 giờ. Sau khoảng thời gian 12 giờ, xác định hoạt tính cellulase bằng phương pháp khuếch tán trên môi trường thạch.
Ảnh hưởng của nguồn cellulose tự nhiên
Nguồn cacbon lần lượt được sử dụng là vỏ trấu, lõi ngô, vỏ lạc, nuôi cấy chủng trong thời gian 36 giờ, sau đó lấy dịch enzyme xác định hoạt tính cellulase bằng phương pháp khuếch tán môi trường thạch.
Ảnh hưởng của nguồn nitơ
Nuôi cấy các chủng tuyển chọn trên môi trường Czapek-Dox thích hợp với nguồn nitơ được sử dụng lần lượt là: NaNO3, NH4Cl, (NH4)2SO4, pepton trong thời gian là 36 giờ. Sau đó lấy dịch enzyme xác định hoạt tính cellulase bằng phương pháp khuếch tán trên môi trường thạch.