và cao ở pH 5, đệm citrate hoạt tính chitinase tăng mạnh ở pH 5 - 6, cao nhất ở pH 6, đệm phosphate và đệm Na2HPO4 - KH2PO4 hoạt tính chitinase cao ở pH 6 - 7 và giảm ở pH 8, đệm NaOH - Glycine ở pH 8 - 9 hoạt tính enzyme giảm mạnh.
- Chitinase xạ khuẩn C3, E4 và E7: ở đệm acetate hoạt tính chitinase tăng mạnh và cao ở pH 5, đệm citrate hoạt tính chitinase tăng mạnh ở pH 5 - tăng mạnh và cao ở pH 5, đệm citrate hoạt tính chitinase tăng mạnh ở pH 5 - 6, cao nhất ở pH 6, đệm đệm phosphate và đệm Na2HPO4 – KH2PO4 hoạt tính chitinase cao ở pH 6 và giảm ở pH 7 - 8, đệm NaOH - Glycine ở pH 8 - 9 hoạt tính enzyme giảm mạnh.
Trong phản ứng enzyme, phải luơn đảm bảo pH thích hợp nhất cho sự hoạt động của enzyme, muốn vậy phải sử dụng các dung dịch đệm để giữ hoạt động của enzyme, muốn vậy phải sử dụng các dung dịch đệm để giữ vững pH cần thiết cho enzyme. Đối với mỗi enzyme nhất định, pH thích hợp cĩ thể thay đổi tùy theo tính chất và nồng độ cơ chất, nhiệt độ của phản ứng và bản chất của loại dung dịch đệm. Chẳng hạn, Ribonucleaza cĩ pH thích hợp là 8 nếu dùng dung dịch đệm là diethyl butyrat và pH là 7,4 khi dùng dung dịch đệm là phốt phát [2]. Vì vậy chúng tơi chỉ đánh giá sự biến động hoạt tính enzyme chitinase của các chủng xạ khuẩn theo pH tương ứng với từng dung dịch đệm. Trong các độ pH khảo với các dung dịch đệm khác nhau,
enzyme chitinase của 4 chủng xạ khuẩn đều cĩ hoạt tính cao nhất ở pH 5 với dung dịch đệm acetate. dung dịch đệm acetate.
Tuy nhiên, kết quả thí nghiệm ở các biểu đồ 3.1; 3.2; 3.3; 3.4 cho thấy sự biến động của hoạt tính enzyme chitinase theo pH ở các dung dịch đệm sự biến động của hoạt tính enzyme chitinase theo pH ở các dung dịch đệm cũng cĩ sự tương đồng. Hầu như chitinase của 4 chủng xạ khuẩn khảo sát đều hoạt động tốt ở pH 5 - 6. Một số chitinase vi sinh vật cũng cĩ pH tối thích ở vùng acid. Theo Kyoung-Ja Kim và cộng sự chitinase tinh sạch từ
Streptomyces sp. M20, cĩ pH tối thích là 5 - 6 [25]. Chitinase tinh sạch thu nhận từ dịch mơi trường nuơi cấy Enterobacteria sp.NRG4, của Neetu và nhận từ dịch mơi trường nuơi cấy Enterobacteria sp.NRG4, của Neetu và cộng sự cĩ pH tối thích là 5.5 [20].
So sánh với pH tối ưu của điều kiện mơi trường nuơi cấy xạ khuẩn để thu enzyme chitinase cĩ hoạt tính cao. Xạ khuẩn SX1, pH tối ưu của mơi thu enzyme chitinase cĩ hoạt tính cao. Xạ khuẩn SX1, pH tối ưu của mơi trường nuơi cấy là 6 - 8. Xạ khuẩn E4 và E7, pH tối ưu của mơi trường nuơi cấy là 7. Xạ khuẩn C3, pH độ tối ưu của mơi trường nuơi là 6. Thơng thường, pH thích hợp của enzyme gắn liền với pH thích hợp của vi sinh vật. Đơi khi cĩ sự khác biệt nhưng sự chênh lệch khơng lớn lắm do pH thích hợp của enzyme phải phù hợp với ngưỡng pH chung của hệ thống enzyme trong tế bào, cơ thể. Vì vậy, các enzyme chitinase của các chủng xạ khuẩn tuyển chọn hoạt động tốt trong vùng pH 5 - 6 là một kết quả hợp lý.
3.5. Kết quả định danh các chủng xạ khuẩn cĩ hoạt tính chitinase cao
Qua các thí nghiệm, chúng tơi nhận thấy 2 chủng xạ khuẩn SX1 và E7cĩ hoạt tính chitinase vượt trội. Nên tiến hành định danh 2 chủng xạ khuẩn cĩ hoạt tính chitinase vượt trội. Nên tiến hành định danh 2 chủng xạ khuẩn SX1 và E7 bằng phương pháp sinh học phân tử.
Việc định danh được thực hiện bởi Phịng xét nghiệm NK – BIOTEK của Cơng ty Nam Khoa, địa chỉ 793/58 Trần Xuân Soạn, P. Tân Hưng, Q.7, của Cơng ty Nam Khoa, địa chỉ 793/58 Trần Xuân Soạn, P. Tân Hưng, Q.7, TP Hồ Chí Minh. Kết quả định danh như sau.