- Để loại trừ NacetylDglucosamin cĩ trong dung dịch enzyme chitinase xạ khuẩn, thí nghiệm tiến hành đo OD 540nm của dung dịch enzyme phản ứng vớ
Tiến hành nuơi các chủng xạ khuẩn tuyển chọn trong mơi trường MT2 và ủ ở 5 mức nhiệt độ khác nhau : 250C; 350C; 450C; 550 C Sau 7 ngày, thu dịch
enzim xạ khuẩn và xác định hoạt tính enzyme chitinase theo phương pháp định lượng đường khử bằng DNS như ở trên. Thí nghiệm lặp lại 3 lần.
2.3.3.5. Ảnh hưởng của pH mơi trường nuơi cấy
Tiến hành nuơi các chủng xạ khuẩn tuyển chọn trong mơi trường MT2 cĩ độ pH khác nhau : 4,0 ; 5,0 ; 6,0; 7,0; 8,0 ; 9,0 (dùng Na2CO3 5% và HCl 5% để độ pH khác nhau : 4,0 ; 5,0 ; 6,0; 7,0; 8,0 ; 9,0 (dùng Na2CO3 5% và HCl 5% để điều chỉnh pH của mơi trường). Sau 7 ngày, thu dịch enzyme xạ khuẩn và xác định hoạt tính enzyme chitinase theo phương pháp định lượng đường khử bằng DNS. Thí nghiệm lặp lại 3 lần.
2.3.4. Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng của một số yếu tố đến hoạt tính chitinase của các chủng xạ khuẩn tuyển chọn trong phản ứng xúc tác chitinase của các chủng xạ khuẩn tuyển chọn trong phản ứng xúc tác
2.3.4.1. Ảnh hưởng của thời gian phản ứng
2 ml enzyme xạ khuẩn trộn với 2 ml chitin huyền phù 1%, pH 5, ủ trong các khoảng thời gian khác nhau : 10 phút; 20 phút; 40 phút; 1 giờ; 2 giờ; 4 giờ; 6 các khoảng thời gian khác nhau : 10 phút; 20 phút; 40 phút; 1 giờ; 2 giờ; 4 giờ; 6 giờ; 8 giờ; 10 giờ; 12 giờ. Sau đĩ định lượng N-acetyl-D-glucosamin bằng DNS để xác định hoạt tính enzyme chitinase. Từ kết quả nhận được, xác định thời gian phản ứng tối ưu cho hoạt tính chitinase. Mỗi thí nghiệm lặp lại 3 lần.
2.3.4.2. Ảnh hưởng của nồng độ cơ chất
2ml enzyme xạ khuẩn trộn với 2ml chitin huyền phù, pH 5 với các nồng độ là 0,1% ; 0,5%; 1,0%; 1,5%; 2,0%. Cho phản ứng trong 2 giờ, sau đĩ định độ là 0,1% ; 0,5%; 1,0%; 1,5%; 2,0%. Cho phản ứng trong 2 giờ, sau đĩ định lượng N-acetyl-D-glucosamin bằng DNS để xác định hoạt tính enzyme chitinase. Từ kết quả nhận được, xác định nồng độ cơ chất tối ưu cho hoạt tính chitinase. Mỗi thí nghiệm lặp lại 3 lần.
2.3.4.3. Ảnh hưởng của nhiệt độ phản ứng
2 ml enzyme xạ khuẩn trộn với 2 ml chitin huyền phù 1%, pH 5 ủ ở các điều kiện nhiệt độ khác nhau: 280C ; 350C ; 450C ; 550C ; 650C ; 750C trong 2 điều kiện nhiệt độ khác nhau: 280C ; 350C ; 450C ; 550C ; 650C ; 750C trong 2 giờ. Sau đĩ tiến hành định lượng N-acetyl-D-glucosamin bằng DNS để xác định hoạt tính enzyme chitinase. Từ kết quả nhận được, xác định nhiệt độ tối ưu cho hoạt tính chitinase. Mỗi thí nghiệm lặp lại 3 lần.
2.3.4.4. Ảnh hưởng của pH phản ứng