PHẦN 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Khảo sát khả năng tái sinh của ĐST nuôi cấy trên môi trƣờng MS
4.3.2 Kết quả kiểm tra PMWaV-
Sau khi kiểm tra PMWaV -2 bằng kĩ thuật RT- PCR kết quả đạt được như sau:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
1500bp
Hình 4.6 Kết quả điện di sản phẩm RT-PCR của chồi dứa Cayenne tái sinh từ ĐST sử
dụng primer đặc trưng cho PMWaV-2
Giếng 1, 2, 3: mẫu Cayenne Trung Quốc, Thái Lan và Lâm Đồng không qua xử lí nhiệt.
Giếng 4: thang chuẩn từ 100 – 1500 bp
Giếng 5, 6, 7: mẫu Cayenne Trung Quốc đã qua xử lí nhiệt Giếng 8, 9, 10: mẫu Cayenne Thái Lan đã qua xử lí nhiệt Giếng 11,12, 13: mẫu Cayenne Lâm Đồng đã qua xử lí nhiệt Giếng 14: đối chứng PMWaV-2 dương tính
Giếng 15: đối chứng PMWaV-2 âm tính (không chứa RNA khuôn mẫu)
Hình 4.6 cho thấy tất cả các mẫu kiểm tra đều âm tính với PMWaV-2. Kết quả này có độ chính xác cao do mẫu đối chứng dương và đối chứng âm đều thể hiện tốt. Như vậy 100% mẫu kiểm tra đều có kết quả PMWaV-2 âm tính.
Kết quả kiểm tra PMWaV của các mẫu chồi tái sinh từ ĐST được tóm tắt qua bảng sau:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 15
609 bp 1500bp 1500bp
Bảng 4.8 Kết quả kiểm tra PMWaV ở chồi dứa Cayenne tái sinh từ ĐST sau 70 ngày
nuôi cấy
Giống Xử lí nhiệt
Tỉ lệ chồi dứa nhiễm PMWaV (%)
PMWaV-1 PMWaV-2 TQ - 100 0 TL - 100 0 LĐ - 100 0 TQ + 66,67 0 TL + 100 0 LĐ + 33,33 0 Ghi chú:
TQ: Trung Quốc, TL: Thái Lan, LĐ: Lâm Đồng (-): không xử lí nhiệt, (+): xử lí nhiệt
Bảng 4.8 cho thấy số chồi dứa tái sinh nhiễm PMWaV-1 khá cao trong khi 100% mẫu kiểm tra cho kết quả âm tính với PMWaV- 2. Các ĐST tái sinh thuộc giống Cayenne Trung Quốc và Lâm Đồng không xử lí nhiệt vẫn còn nhiễm PMWaV-1. Nguyên nhân chồi tái sinh còn nhiễm virus có thể do mật độ virus trong chồi dứa in vitro ban đầu cao, phần mô phân sinh đỉnh sạch virus rất nhỏ và xác suất có được chồi dứa tái sinh sạch virus bằng phương pháp nuôi cấy ĐST rất thấp.
Phương pháp xử lí nhiệt kết hợp nuôi cấy ĐST bước đầu cho thấy hiệu quả loại bỏ virus. Với phương pháp này 100% chồi dứa tái sinh thuộc giống Cayenne Thái Lan sạch PMWaV-1, ở giống Cayenne Trung Quốc tỉ lệ này rất thấp chỉ đạt 33,33% (66,67% nhiễm PMWaV-1) và giống Cayenne Lâm Đồng đạt 66,67%. Sự khác biệt này có thể do mức độ nhiễm PMWaV-1 của chồi dứa in vitro ban đầu và sự khác nhau về hiệu quả xử lí nhiệt ở từng giống. Ngoài ra, kích thước mẫu cấy cũng ảnh hưởng đến hiệu quả loại bỏ virus. Kích thước mẫu càng lớn thì khả năng nhận được cây sạch virus càng thấp.
Tuy nhiên, từ kết quả trên chưa đánh giá được hiệu quả của các phương pháp tạo cây sạch virus áp dụng trong đề tài trong việc loại bỏ PMWaV-2 do 100% mẫu kiểm tra cho kết quả âm tính với PMWaV-2.