PHẦN 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Khảo sát khả năng tái sinh của ĐST nuôi cấy trên môi trƣờng MS
4.3. Kết quả kiểm tra PMWaV chồi tái sinh từ ĐST 1 Kết quả kiểm tra PMWaV-
4.3.1 Kết quả kiểm tra PMWaV-1
Sau khi kiểm tra PMWaV -1 bằng kĩ thuật RT- PCR ta có kết quả như sau:
1500bp
589 bp
Hình 4.4 Kết quả điện di sản phẩm RT - PCR của chồi dứa Cayenne tái sinh từ ĐST
không qua xử lí nhiệt sử dụng primer đặc trưng cho PMWaV-1. . Giếng 1: thang chuẩn với các kích thước từ 100 – 1500 bp
Giếng 2,3,4: mẫu Cayenne Trung Quốc, Thái Lan và Lâm Đồng Giếng 5: đối chứng âm không chứa RNA khuôn mẫu
Giếng 6: đối chứng dương
Kết quả điện di của mẫu chồi dứa tái sinh từ ĐST không xử lí nhiệt (Hình 4.4) cho thấy cả 3 mẫu kiểm tra đều có PMWaV-1. Ở giếng 2, 3 và 4 đều xuất hiện band kích thước 589 bp đặc trưng của PMWaV-1. Những vạch trắng mờ ở cuối gel có thể là những RNA bị đứt gãy hay RNA tạp được khuếch đại một cách ngẫu nhiên bởi primer. Vệt trắng mờ ở giếng đối chứng âm có thể do gắn kết dimer của primer. Hiện tượng này có thể khắc phục được bằng cách tăng nhiệt độ bắt cặp làm tăng tính đặc hiệu của primer. Hình 4.3 cho thấy các mẫu chồi dứa tái sinh từ ĐST không qua xử lí nhiệt vẫn còn PMWaV-1.
Hình 4.5 Kết quả điện di sản phẩm RT - PCR của chồi dứa Cayenne tái sinh từ ĐST
đã qua xử lí nhiệt sử dụng primer đặc trưng cho PMWaV-1 Giếng 1: thang chuẩn với các kích thước từ 100 – 1500 bp
Giếng 2, 3, 4: mẫu Cayenne Trung Quốc Giếng 5: đối chứng dương
Giếng 6, 7, 8: mẫu Cayenne Thái Lan Giếng 9, 10, 11: mẫu Cayenne Lâm Đồng
Giếng 12: đối chứng âm không có RNA khuôn mẫu
Hình 4.5 cho thấy trong 9 mẫu chồi tái sinh từ ĐST đã xử lí nhiệt chỉ có 3 mẫu có kết quả PMWaV-1 dương tính. Ở giếng 2, 4, và 9 xuất hiện band kích thước 589 bp giống như giếng đối chứng dương. Như vậy các mẫu còn nhiễm PMWaV-1 bao gồm 2 mẫu Cayenne Trung Quốc và 1 mẫu Cayenne Lâm Đồng; cả 3 mẫu Cayenne Thái Lan đều không nhiễm PMWaV-1.