X. Phân tích điều tiết phiên mã nhờ thử nghiệm CAT (CAT assay)
KỸ THUẬT PHÂN TÍCH XÁC NHẬN PHÂN TỬ I Kỹ thuật lai Southern (Southern hybridization)
I. Kỹ thuật lai Southern (Southern hybridization)
Kỹ thuật chuyển/lai Southern (hay phương pháp Southern transfer/hybridization) là tổ hợp kỹ thuật được Southern sáng tạo được công bố vào 1975, nhờ đó có thể đồng định một nucleic acid làm mẫu dò, hay dò (probe) đã đánh dấu với một DNA có miền mang trình tự nucleotide bổ sung, tức là dùng mẫu dò đã biết để xác nhận sự hiện diện của DNA tương đồng trong mẫu nghiệm, là một trong những phương pháp hữu ích áp dụng trong nghiên sinh học phân tử. DNA mẫu nghiệm có thể là nguyên vẹn. Thêm vào đó, trong nhiều trường hợp, sau khi cắt DNA bằng enzyme hạn chế và điện di trong gel agarose để phân li rồi chuyển qua và cố định trên màng nitrocellulose (hoặc màng nylon, sau này hay dùng hơn do bền và cố định DNA rất tốt và có thể tái sử dụng), thực hiện lai với mẫu dò đã đánh dấu có thể kiểm xuất được những đoạn DNA trên màng có trình tự bổ sung với mẫu dò.
Thí nghiệm trình bày dưới đây là nguyên gốc sử dụng mẫu dò (probe) đánh dấu phóng xạ. Ngày nay các mẫu dò đánh dấu phi phóng xạ đã phổ biến, có thể đặt mua và vận dụng thay thế, khi đó phương pháp autoradiography (tự ký phóng xạ) được thay thế bằng phương pháp fluorography (huỳnh quang ký, hoặc sử dụng thiết bị đọc non-RI fluorescence, như FMBIO II Multi-View, chẳng hạn) hoặc phương pháp đánh dấu biotin phát hiện được nhờ streptavidin (hoặc DIG phát hiện bằng kháng thể đặc hiệu DIG, tương ứng) đánh dấu enzyme akaline phosphatase (AP) để nhận biết kết quả lai với sự hỗ trợ của hợp chất quang hóa (chemiluminescent substrate) như CDP-Star, Lumi-Phos 530, CSDP (hoặc đánh dấu enzyme horse radish peroxidase (HRPO) với cơ chất quang hóa là ECL hoặc LumiGLO). Phương pháp trình bày dưới đây sử dụng mẫu dò đánh dấu phóng xạ như ban đầu phát kiến ra phương pháp này.