Chương 2 VẬT LIỆU PHƯƠNG PHÁP
2.2.7.Đo hàm lượng diệp lục tố
Sau khi li trích, hàm lượng diệp lục tố của vi tảo được đo theo phương pháp quang phổ (Helcom, 2001; Wasmund, Top, Schories, 2006).
Trong điều kiện nhiệt độ phòng thí nghiệm, một thể tích xác định (21 ml) dịch nuôi được lọc qua màng lọc Whatman có kích thước lỗ màng là 0,45 µm. Để khô mẫu lọc trong vài giờ, có thể đặt mẫu lọc (mặt không chứa vi tảo) trên giấy thấm để mau khô hơn. Cắt nhỏ mẫu, rồi tiến hành li trích diệp lục tố bằng 5ml ethanol 96%, trong khoảng 6 – 24 h, trong quá trình trích, tránh để ethanol trong mẫu trích bị bay hơi. Dịch trích được quay li tâm ở 12.500 vòng trong 10 phút để loại bỏ hết mảnh vụn của màng lọc có thể còn sót lại. Li trích xong phải tiến hành đo ngay. Đo quang phổ bằng máy Shimadzu UV 1601 PC, ở các bước sóng 750 và 663 – 665 nm với đối chứng là dung môi chuẩn ethanol 96%.
Ánh sáng phá huỷ diệp lục tố, đặc biệt nếu có thêm sự hiện diện của oxi. Do đó, tất cả các thao tác tiến hành trong thí nghiệm trích diệp lục tố phải thực hiện trong điều kiện ánh sáng mờ hoặc ánh sáng xanh lục.
Hàm lượng diệp lục tố của mẫu được tính theo công thức:
3 665 665 10 . . . 83. . k e A Chl a V l = mg/mP 3 Trong đó:
- Chl.a là hàm lượng diệp lục tố (mg/mP 3 P ). - e là thể tích ethanol đã dùng để li trích (cmP 3 P ).
- AR665kRPP là hiệu số các độ hấp thu quang phổ ở đỉnh 665 nm và 750 nm. - l là bề rộng ống chứa mẫu đo quang phổ (cm)
- V là thể tích mẫu dùng để lọc và li trích diệp lục tố (dmP 3
P
) - 83 là hệ số hấp thu trong ethanol 96% (Helcom, 2001)