4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.2.4. Kết quả kiểm tra hiệu lực
Tắnh hiệu lực nói lên khả năng bảo hộ ựộng vật sau khi ựược sử dụng vacxin. Kiểm tra hiệu lực của vacxin là yêu cầu cần thiết ựối với mỗi lô sản xuất. Có nhiều phương pháp ựể ựánh giá hiệu lực của lô vacxin như phương pháp trọng tài và phương pháp thay thế. Trong khuôn khổ của ựề tài chúng tôi thực hiện bằng biện pháp thay thế.
Kết quả kiểm tra hiệu lực bằng phương pháp thay thế:
để tiến hành thắ nghiệm, chúng tôi ựã bố trắ 2 lô gà như ựã trình bày ở mục a (3.4.1.6). 14 ngày sau khi sử dụng vacxin lần 2, lấy máu gà ở các lô thắ nghiệm, chắt huyết thanh và kiểm tra hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle bằng phản ứng HI, hiệu giá kháng thể kháng virus Gumboro và Viêm phế quản truyền nhiễm bằng phản ứng ELISA. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle, Gumboro và Viêm phế quản truyền nhiễm trong huyết thanh của gà sau khi sử dụng vacxin ựa giá ựược trình bày ở bảng 4.5.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 53
Bảng 4.5. Kết quả kiểm tra hiệu lực các lô vacxin ựa giá bằng phương pháp thay thế
Kháng thể kháng virus Newcastle Kháng thể kháng virus
Gumboro
Kháng thể virus IB
Hiệu giá kháng thể trung bình
(log2) Tỷ lệ S/P trung bình Tỷ lệ S/P trung bình
Lô vacxin Lô TN 3 (n=20) Lô đC 2 (n=10) Lô TN 3 (n=20) Lô đC 2 (n=10) Lô TN 3 (n=20) Lô đC 2 (n=10) I 3,86 ổ 1,47 2,17 ổ 1,14 0,46 ổ 0,17 0,16 ổ 0,15 0,23 ổ 0,07 0,10 ổ 0,03 II 3,46 ổ 1,22 1,17 ổ 0,63 0,58 ổ 0,28 0,19 ổ 0,09 0,21 ổ 0,09 0,09 ổ 0,03 III 3,38 ổ 1,15 1,50 ổ 1,01 0,53 ổ 0,23 0,11 ổ 0,03 0,23 ổ 0,09 0,13 ổ 0,04 IV 3,58 ổ 1,46 1,83 ổ 1,23 0,48 ổ 0,19 0,15 ổ 0,06 0,34 ổ 0,12 0,12 ổ 0,06 V 4,24 ổ 1,08 0,97 ổ 0,89 0,51 ổ 0,22 0,12 ổ 0,08 0,31 ổ 0,11 0,14 ổ 0,07
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 54
Từ kết quả bảng 4.5 cho thấy:
- đối với hiệu giá kháng thể kháng virus Gumboro: Hiệu giá kháng thể kháng virus Gumboro ựược xác ựịnh bằng phản ứng ELISA. Hình ảnh ELISA Ờ hiệu giá kháng thể kháng virus Gumboro ựược minh họa qua hình 4.3.
Hình 4.3: Kiểm tra hiệu giá kháng thể kháng virus Gumboro bằng phản ứng ELISA
Tỷ lệ S/P trung bình của lô gà miễn dịch ựều lớn hơn 0,2 (biến ựộng từ 0,46 Ờ 0,58), trong ựó lô vacxin ựa giá sản xuất thử nghiệm thứ 2, 3 và 5 ựều có tỷ lệ S/P trung bình cao và cao nhất là lô vacxin 5 ựạt tỷ lệ S/P trung bình là 0,58 ổ 0,28 còn lô vacxin ựa giá sản xuất thử nghiệm số 1 ựạt tỷ lệ S/P trung bình là 0,46 ổ 0,17. Các lô gà ựối chứng nhỏ hơn 0,2 (biến ựộng từ 0,11 Ờ 0,19) trong ựó cao nhất là lô vacxin sản xuất thử nghiệm thứ 2 ựạt tỷ lệ S/P trung bình là 0,19 ổ 0,09 và thấp nhất là lô vacxin thứ 3 ựạt tỷ lệ S/P trung bình là 0,11 ổ 0,03. Theo hướng dẫn của hãng Index, Mỹ sản xuất các bộ kit ELISA virus Gumboro có tỷ lệ S/P trung bình lớn hơn 0,2 ựược xác ựịnh là
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 55
dương tắnh và ngược lại nhỏ hơn 0,2 ựược xác ựịnh là âm tắnh. Như vậy các lô vacxin ựa giá sản xuất thử nghiệm ựạt chỉ tiêu hiệu lực chống bệnh Gumboro.
- đối với hiệu giá kháng thể kháng virus IB: Hiệu giá kháng thể kháng virus IB bằng phương pháp ELISA ựược minh họa qua hình 4.4.
Hình 4.4. Kiểm tra hiệu giá kháng thể kháng virus IB bằng phản ứng ELISA
Tỷ lệ S/P trung bình của kháng thể IB trong huyết thanh của gà ở các lô miễn dịch ựều lớn hơn 0,15 (biến ựộng từ 0,21 Ờ 0,34), trong ựó cao nhất là lô vacxin IV ựạt tỷ lệ S/P trung bình là 0,34 ổ 0,12 và thấp nhất là lô vacxin II ựạt tỷ lệ S/P trung bình là 0,21 ổ 0,09. Các lô gà ựối chứng ựều nhỏ hơn 0,15 (biến ựộng từ 0,09 Ờ 0,14) trong ựó cao nhất là lô vacxin V ựạt tỷ lệ S/P trung bình là 0,14 ổ 0,07 và thấp nhất là lô vacxin II ựạt tỷ lệ S/P trung bình là 0,09 ổ 0,03. Theo hướng dẫn của hãng Synbiotic sản xuất bộ kắt ELISA thì các lô
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 56
vacxin ựa giá ựạt chỉ tiêu hiệu lực chống bệnh Viêm phế quản truyền nhiễm. - đối với hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle: hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle ựược minh họa ở hình 4.5.
Hình 4.5: Kiểm tra hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle bằng phản ứng HI
Hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle trung bình trong huyết thanh của gà ở các lô miễn dịch ựều lớn hơn 3log2 (biến ựộng từ 3,38 Ờ 4,24 log2) trong ựó cao nhất là lô vacxin IV ựạt tỷ lệ HI trung bình là 4,24 ổ 1,08 và thấp nhất là lô vacxin I ựạt tỷ lệ HI trung bình là 3,38 ổ 1,15 log2. Các lô gà ựối chứng ựều nhỏ hơn 3log2 trong ựó cao nhất là lô vacxin II ựạt tỷ lệ HI trung bình là 0,97 ổ 2,17 và thấp nhất là lô vacxin III có tỷ lệ HI trung bình là 0,97 ổ 0,89 log2.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 57
(1993), khi sử dụng virus Newcastle chủng Lasota chiệu nhiệt làm vacxin phòng bệnh.
Tham chiếu theo tiêu chuẩn ASEAN (2002) và OIE (2008) khẳng ựịnh các lô vacxin ựa giá ựều ựạt chỉ tiêu hiệu lực chống bệnh Newcastle.
Qua các thắ nghiệm trên, chúng tôi rút ra kết luận:
- Vacxin ựa giá ND-IBD-IB sản xuất thử nghiệm ựạt chỉ tiêu về ựộ ẩm và ựộ chân không.
- Vacxin an toàn cho gà 7 ngày tuổi khi dùng liều vacxin gấp 10 lần liều sử dụng, theo ựường nhỏ mắt nhỏ mũi hoặc cho uống, theo dõi trong 14 ngày gà vẫn ăn uống hoạt ựộng bình thường.
- Vacxin cũng ựạt chỉ tiêu hiệu lực chống lại các bệnh Newcastle, Gumboro và Viêm phế quản truyền nhiễm.
4.3. đánh giá tỷ lệ bảo hộ của gà ựối với bệnh Newcastle sau khi ựược sử dụng vacxin ựa giá dụng vacxin ựa giá
Hiện tượng ảnh hưởng qua lại giữa các chủng virus trong vacxin ựa giá nhược ựộc ựông khô phòng các bệnh Newcastle, Gumboro, Viêm phế quản truyền nhiễm ựã ựược nghiên cứu từ những năm 1950 và các nhà khoa học ựã thông báo về những bất lợi của chúng tới ựáp ứng miễn dịch của gia cầm. Vì vậy ựể ựánh giá chất lượng của vacxin ựa giá ựược sản xuất từ các nguyên dịch phối hợp, chúng tôi ựánh giá khả năng kắch thắch sinh miễn dịch vủa virus của vacxin Newcastle trong vacxin ựa giá phòng bệnh cho ựàn gà thịt và so sánh với vacxin ựơn giá cùng loại.
Bố trắ thắ nghiệm như ựã trình bày ở mục 3.4.2. Sau nhỏ vacxin lần hai 14 ngày tiến hành công cường ựộc toàn bộ ba lô gà thắ nghiệm. Theo dõi gà trong vòng 14 ngày. Quan sát những biểu hiện triệu chứng lâm sàng, những con chết ựược mổ khám, kiểm tra bệnh tắch và tắnh tỷ lệ bảo hộ
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 58
Bảng 4.6: Kết quả công cường ựộc gà các lô thắ nghiệm
Các chỉ tiêu theo dõi Lô TN 4 Lô TN 5 Lô đC 3
Số gà thắ nghiệm (con) 20 20 10
Tuổi gà nhỏ vacxin lần ựầu (ngày) 7 7 -
Tuổi gà nhỏ vacxin lần 2 (ngày) 14 14 -
đường ựưa vacxin Nhỏ mắt +
nhỏ mũi
Nhỏ mắt +
nhỏ mũi -
Tuổi gà công cường ựộc (ngày) 28 28 28
Số gà công cường ựộc (con) 20 20 10
Liều công cường ựộc 105EID50 /0,25 ml
đường công cường ựộc Tiêm bắp Tiêm bắp Tiêm bắp
Số gà sau khi công cường ựộc có
triệu chứng lâm sàng và chết (con) 1 3 10
Số gà sống sau khi công cường ựộc
(con) 19 17 0
Tỷ lệ bảo hộ (%) 95 85 0
Qua bảng trên cho thấy:
Lô thắ nghiệm 4 sử dụng vacxin ựơn giá, có 1 con có biểu hiện triệu chứng lâm sàng và chết. Tỷ lệ bảo hộ ựạt 95%. Lô thắ nghiệm 5 sử dụng vacxin ựa giá sản xuất thử nghiệm, có 3 con có biểu hiện triệu chứng lâm sàng và chết. Tỷ lệ bảo hộ ựạt 85%. Tuy nhiên gà chết ở cả 2 lô ựều không có triệu chứng và bệnh tắch ựặc trưng của bệnh Newcastle. Trong khi ựó lô ựối chứng 3 Ờ không ựược sử dụng vacxin thì toàn bộ gà ựều có biểu hiện triệu
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 59
chứng lâm sàng ựặc trưng của bệnh Newcastle: gà ủ rũ, mệt mỏi kém hoạt ựộng, bỏ ăn, lông xù lên, cánh xoã ra như khoác áo tơi. Gà tiêu chẩy, phân loãng, phân mầu xanh lẫn trắng. Gà sốt cao, khó thở, chảy nước mũi. Gà ựứng tản mạn, lù dù, hai cánh xõa ra trông giống như ựang mặc áo tơi. Dốc ngược con gà lên thì từ miệng con gà chẩy ra nước nhớt, có mùi chua khắm. Gà có biểu hiện triệu chứng rõ nhất và nặng nhất vào ngày thứ 2 và thứ 3, sau ựó gà chết dần ựến ngày thứ 5 thì gà ở lô ựối chứng chết hết.
Gà chết: xác chết xơ xác, hậu môn bẩn Ờ lông bết phân, gà nằm nghẹo ựầu, nghẹo cổ. Mổ khám thấy: niêm mạc dạ dầy tuyến, dạ dầy cơ xuất huyết, ựặc biệt là niêm mạc ựường tiêu hoá có hiện tượng xuất huyết hình cúc áo ,Ầ Các bệnh tắch của bệnh ựược thể hiện qua hình 4.6, hình 4.7 và hình 4.8.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 60
Hình 4.7: Xuất huyết dạ dầy tuyến, dạ dầy cơ
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 61