3. NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.4.1. Phương pháp kiểm tra chất lượng vacxin
3.4.1.1. Lấy mẫu
Áp dụng phương pháp lấy mẫu theo tiêu chuẩn quốc gia TCVN 160-92 "Vacxin thú y - Quy trình lấy mẫu và sử dụng mẫu trong kiểm nghiệm". Mỗi lô vacxin lấy 1% số thành phẩm (Tối thiểu 3 mẫu, tối ựa 10 mẫu).
3.4.1.2. Phương pháp kiểm tra ựộ ẩm
Có nhiều phương pháp ựể xác ựịnh ựộ ẩm như: phương pháp sấy khô vacxin trong chân không, phương pháp xác ựịnh ựộ ẩm không hoàn toàn hoặc phương pháp cộng hưởng từ tắnh nguyên tử. Việc xác ựịnh ựộ ẩm vacxin ựông khô ựược chúng tôi tiến hành kiểm tra trên thiết bị phân tắch ựộ ẩm - Sartorius MA.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 34
Thiết bị ựo ựộ ẩm theo phương pháp làm mất nước trong mẫu bằng nhiệt sử dụng tia hồng ngoại, halogen và vi sóng. Thiết bị cho kết quả phân tắch sau 3 - 15 phút.
3.4.1.3. Phương pháp kiểm tra ựộ chân không
Mức ựộ chân không trong từng lọ vacxin ựông khô thường ựược xác ựịnh bằng một thiết bị kiểm tra phát ra các tia sáng có tần số cao (high frequency). Thiết bị này phát hiện sự có mặt và mức ựộ chân không của từng lọ vacxin. Khi kiểm tra, người ta ựưa thiết bị qua từng lọ vacxin ựược ựặt nằm ngang, nếu lọ vacxin phát ánh sáng màu tắm ựậm thì lọ vacxin có chân không cao, nếu lọ vacxin phát ra ánh sáng màu tắm nhạt hoặc xanh thì lọ vacxin ựó có chân không thấp hoặc không có chân không. Những lọ vacxin không có chân không sẽ bị loại bỏ.
3.4.1.4. Phương pháp kiểm tra vô trùng
Áp dụng phương pháp theo tiêu chuẩn quốc gia TCVN 161 Ờ 92 ỘVacxin thú y Ờ Quy trình kiểm tra vô trùngỢ.
− Pha vacxin trở lại dạng ban ựầu.
− Cấy huyễn dịch trên vào các môi trường qui ựịnh (Thạch máu, nước thịt, nước thịt gan yếm khắ, thạch nấm), mỗi loại môi trường cấy 2 ống.
− Lượng vacxin cấy kiểm tra bằng 1 ựến 2% dung tắch môi trường.
− Môi trường ựã cấy kiểm tra ựem bồi dưỡng trong tủ ấm 370C, riêng môi trường nấm ựể ở nhiệt ựộ phòng (25 - 300C). Theo dõi các ống môi trường trong 7 ngày.
Vacxin ựược xem là ựạt tiêu chuẩn khi các môi trường kiểm tra không có vi khuẩn hoặc chỉ có một khuẩn lạc hiếu khắ không dung huyết trong một liều sử dụng ựối với vacxin ựông khô.
3.4.1.5. Phương pháp kiểm tra an toàn
Các lô vacxin ựa giá ựược kiểm tra an toàn ựối với gà 7 ngày tuổi. Mỗi lô kiểm tra 45 gà (ựủ tiêu chuẩn thắ nghiệm), ựược chia làm 3 lô bố trắ như sau:
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 35
- Lô TN 1: 15 con sử dụng 10 liều vacxin. - Lô TN 2: 15 con sử dụng 1 liều vacxin. Vacxin theo ựường nhỏ mắt, cho uống.
- Lô đC 1: 15 con không sử dụng vacxin làm ựối chứng. Theo dõi các lô gà thắ nghiệm trong 14 ngày.
Vacxin ựạt yêu cầu khi không có gà nào ở lô TN biểu hiện lâm sàng nghiêm trọng và không có gà chết.
3.4.1.6. Kiểm tra hiệu lực
Kiểm tra hiệu lực bằng phương pháp xác ựịnh hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh của gà sau khi ựược sử dụng vacxin ựa giá.
Bố trắ thắ nghiệm: sử dụng 2 lô gà 7 ngày tuổi.
- Lô TN 3: 20 gà ựược sử dụng vacxin ựa giá 2 lần lúc 7 và 14 ngày tuổi, mỗi lần nhỏ mắt, cho uống 1 liều vacxin.
- Lô đC 2: 10 gà không sử dụng vacxin làm ựối chứng.
14 ngày sau khi sử dụng vacxin lần 2, lấy máu tất cả gà ở các lô, chắt huyết thanh và ựánh giá hiệu lực các lô vacxin ựa giá thông qua việc xác ựịnh lượng kháng thể trong huyết thanh của gà.
- Kiểm tra kháng thể Newcastle bằng phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI) ựược tiến hành theo phương pháp của Nguyễn Như Thanh và cs, (2001).
- Kiểm tra kháng thể Gumboro bằng phản ứng ELISA: Sử dụng bộ kắt ELISA virus Gumboro thương mại của hãng IDEXX, Mỹ. đánh giá kết quả:
+ Những mẫu huyết thanh có tỷ lệ S/P ≤ 0,2 ựược coi là âm tắnh. + Những mẫu huyết thanh có tỷ lệ S/P > 0,2 ựược coi là dương tắnh. - Kiểm tra kháng thể IB bằng phản ứng ELISA: Sử dụng bộ kắt ELISA virus IB của tập ựoàn Synbiotics. đánh giá kết quả:
+ Những mẫu huyết thanh có tỷ lệ S/P ≤ 0,15 ựược coi là âm tắnh. + Những mẫu huyết thanh có tỷ lệ S/P > 0,15 ựược coi là dương tắnh.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 36