Một xét nghiệm miễn dịch ECL gồm nhiều bước lấy dung dịch, ít nhất một bước ủ và nhiều bước đo lường. Thông thường sẽ có ít nhất 3 thành phần được lấy
cho vào cốc xét nghiệm; đó là mẫu bệnh phẩm, hạt và thuốc thử. Sau khoảng thời
gian ủ thích hợp, hỗn hợp phản ứng được hút vào buồng đo để thực hiện đo lường chất phân tích. Mỗi quy trình hút được giới hạn trong khoảng thời gian là 42s. Số lần hút và trộn tùy thuộc vào phương pháp xét nghiệm (xét nghiệm 1 hay 2 bước). Một số phương pháp có thêm quá trình pha loãng trước hay tiền xử lý thì số bước
thực hiện sẽ tăng thêm. Các bước liệt kê dưới đây được ứng dụng cho tất cả các
phương pháp. Tuy nhiên quá trình thực hiện có thể sẽ khác nhau cho từng xét nghiệm.
1. Chạy xét nghiệm
Sau khi đã lựa chọn xét nghiệm phù hợp với mẫu bệnh phẩm bằng phần mềm, quá trình vận hành được bắt đầu tùy theo giao thức xét nghiệm xác định trước cho từng xét nghiệm. Khởi đầu, ít nhất một thuốc thử R1 hoặc R2, và mẫu hoặc các vi
hạt M được hút lần lượt bằng đầu S/R. Sau mỗi lần hút, đầu ra của S/R được làm
sạch tại trạm rửa. Mẫu và các thuốc thử được cho vào trong cốc mới và AssayTip bị phụt vào khay chứa chất thải rắn.
Một số xét nghiệm yêu cầu pha loãng mẫu hay tiền xử lý, dung dịch pha loãng hay tiền xử lý thuốc thử được hút cùng với mẫu vào trong cốc xét nghiệm. Một phần của mẫu pha loãng đã tiền xử lý sau đó được lấy ra và cho vào cùng thuốc thử ở cốc thứ hai. Vì vậy, một số xét nghiệm tiền xử lý/ pha loãng trước yêu cầu hai hoặc nhiều hơn cốc xét nghiệm. Các bước pha loãng
Xét nghiệm pha loãng 1 bước
- AssayTip 1 → Dung dịch pha loãng (rửa ngoài) + mẫu → AssayCup 1
- AssayTip 2 → R1 (rửa ngoài) + R2 (rửa ngoài) → AssayCup 2 (ủ lần 1)
- AssayTip 3 → M (rửa ngoài) → AssayCup 2 (ủ lần 2)
Xét nghiệm pha loãng 2 bước
- AssayTip 1 → Dung dịch pha loãng (rửa ngoài) + mẫu → AssayCup 1
- AssayTip 21 → Dung dịch pha loãng (rửa ngoài) + mẫu pha loãng từ
AssayCup 1 → AssayCup 2
- AssayTip 3 → R1 (rửa ngoài) + R2 (rửa ngoài) + mẫu pha loãng từ AssayCup
2 → AssayCup 3 (ủ lần 1)
- AssayTip 4 → M (rửa ngoài) → AssayCup 3 (ủ lần 2)
2. Ủ lần đầu ở 37oC
Thời gian ủ kéo dài 4.5 hoặc 9 phút tùy theo từng xét nghiệm. Một số xét nghiệm yêu cầu hai giai đoạn ủ. Số khác có thêm giai đoạn tiền xử lý có thể yêu cầu
3 lần ủ. Trong các giai đoạn ủ, phức hợp miễn dịch được hình thành. 3. Bổ sung thuốc thử
Một số xét nghiệm (thường cần có hơn một lần ủ) yêu cầu bổ sung thuốc thử. Như trong bước hút thuốc thử ban đầu, AssayTip mới được dùng để hút thuốc thử.
AssayTip được rửa sạch sau mỗi lần hút chất lỏng. Chất lỏng này sau đó được đổ
vào cốc chứa mẫu và các chất lỏng khác đã được hút trong bước hút đầu tiên. Đầu hút sau đó được nâng lên ra khỏi cốc. Lúc này, phản ứng của các dung dịch xảy ra trong cốc được gia tốc. Assaytip sau đó bị cho vào khay chứa chất thải rắn.
4. Ủ lần hai ở 37oC
Bước ủ lần hai được thực hiện nếu cần thiết, kéo dài 4,5 phút hoặc 9 phút tùy theo xét nghiệm.
5. Bổ sung thuốc thử ( với các quy trình xét nghiệm có khâu tiền xử lý)
6. Ủ lần ba ở 37oC (các quy trình xét nghiệm có khâu tiền xử lý): bước ủ này kéo dài 9 phút
7. Hút hỗn hợp phản ứng
Khối hút hút các Procell (tripropylamine solution, TPA) để chuẩn bị cho
buồng đo. Sau đó, hút hỗn hợp phản ứng từ cốc và vận chuyển tới buồng đo. Đầu
thăm sau đó được rửa sạch và procell sau đó được hút lại để rửa hết các thành phần gắn của thuốc thử và mẫu. Tiếp theo, phản ứng ECL sẽ xảy ra tại buồng đo.
8. Làm sạch buồng đo
Sau khi quá trình đo được hoàn thành, buồng đo được làm sạch bằng dung
dịch Cleancell và được chuẩn bị sẵn sàng cho một quá trình đo mới. Sẽ mất 42s
(một chu kỳ hút) từ khi hút hỗn hợp phản ứng bằng đầu sipper tới khi buồng đo
9. Kết thúc
30 phút sau kể từ kết thúc lần đo cuối cùng, toàn bộ hệ thống đường ống của máy được rửa bằng nước và sau đó rửa buồng đo bằng dung dịch procell. Máy trở về trạng thái chờ. Sau quy trình này, cứ mỗi 30 phút, bơm chất thải của trạm rửa R/S chạy trong 2s (dung tích thải xấp xỉ 12ml). Quy trình này sẽ ngừng lại khi tắt máy.