c. Thử nghiệm chụp hình 18F-NaF PET/CT so sánh với 99mTc-MDP SPECT trên thỏ
• Thiết kế thí nghiệm:
12 thỏ đực khỏe mạnh 3 tháng tuổi có trọng lượng 2,0 -2,5 kg, chia làm 3 nhóm, mỗi nhóm 4 con. Trong mỗi nhóm, 3 con được tiêm 18F-NaF của cùng một lô thuốc và một con tiêm NaCl 0,9% làm đối chứng, sau đó đều được gây mê và chụp hình PET/CT.
Sau khi chụp PET/CT, thỏ được nhốt trong chuồng, cho ăn đầy đủ, theo dõi nhiệt độ, mức độ ăn, hoạt động hàng ngày và trong một tuần.
Chụp99mTc-MDP SPECT trên thỏ: Sau một tuần theo dõi, lấy một trong 3 lô thỏ ở trên tiêm99mTc-MDP. Sau khi tiêm 3 giờ thỏ được gây mê và chụp hình SPECT.
• Tiến hành:
Nhóm tiêm18F-NaF: mỗi thỏ được tiêm 3 - 4 mCi18F-NaF trong 1 ml dung dịch NaCl 0,9% qua tĩnh mạch tai thỏ. Sau khi tiêm 1 giờ, thỏ được gây mê bằng Propofol-Lipuro 1%(10mg/ml) với liều 10-15mg/kg cân nặng, cố định thỏ trên một miếng gỗ và tiến hành chụp hình PET/CT.
Nhóm tiêm dung dịch NaCl 0,9%, mỗi thỏ được tiêm 1 ml dung dịch NaCl 0,9% qua tĩnh mạch tai thỏ. Sau khi tiêm 1 giờ, thỏ được gây mê bằng Propofol-Lipuro 1%(10mg/ml) với liều 10-15mg/kg cân nặng, cố định thỏ trên một miếng gỗ và tiến hành chụp hình PET/CT.
Chụp SPECT trên thỏ : thỏ được tiêm 3-4 mCi99mTc-MDP với thể tích 1ml và sau 1 giờ được gây mê bằng Propofol-Lipuro 1%(10mg/ml) với liều 10- 15mg/kg cân nặng, cố định thỏ trên một miếng gỗ và tiến hành chụp hình SPECT.
d. Đánh giá độc tính cấp của 18F-NaF trên chuột nhắt trắng
DCPX18F-NaF cũng giống như các DCPX khác cho PET khá an toàn vì chưa có báo cáo nào cho thấy có biến chứng khi sử dụng trong lâm sàng. Đây là DCPX sử dụng cho chẩn đoán hình ảnh nên thử nghiệm được tiến hành dựa theo phương pháp thử độc tính đơn liều dành cho các hoạt chất dùng liều rất nhỏ theo hướng dẫn của Cơ quan quản lý Dược phẩm châu Âu (EMA) [37], kết hợp với các nguyên tắc chung trong nghiên cứu độc tính cấp theo hướng dẫn của tổ chức Hợp tác và Phát triển Kinh tế (OECD) [38], [65].
• Thiết kế thí nghiệm:
Chuột nhắt trắng mỗi giống (đực hoặc cái) chia ngẫu nhiên thành 2 lô, mỗi lô 16 con. Chuột nhịn ăn 3 giờ trước khi thí nghiệm, nước uống theo nhu cầu. Kiểm tra cân nặng trước khi thử nghiệm.
• Tiến hành:
Lô chứng được tiêm nước muối sinh lý với liều 0,2ml/20g chuột; Lô thử nghiệm được tiêm 18F-NaF với liều 0,34 mCi/20g theo đường tiêm tĩnh mạch đuôi với liều duy nhất.
• Theo dõi đánh giá:
Cả 2 lô sau khi tiêm, chuột được cho ăn trở lại và được theo dõi tình trạng chung trong vòng 24 giờ, 14 ngày sau khi tiêm. Chọn ngẫu nhiên 10 động vật/lô/giống để lấy máu làm các xét nghiệm sinh hóa và huyết học, mổ quan
sát đại thể các cơ quan. Lấy ngẫu nhiên 3 chuột trong mỗi lô để làm tiêu bản vi thể gan và thận. Các động vật còn lại mỗi lô nuôi thêm 2 tuần để theo dõi sự hồi phục của các cơ quan sau thời gian ngừng dùng thuốc. Quy trình tương tự cũng được áp dụng với các động vật còn lại của mỗi lô (6 động vật/lô/giống) vào ngày thứ 14 của thử nghiệm.
2.3.6 Phương pháp xử lý số liệu
• Sử dụng phần mềm Microsoft Excel 2016.
• Số liệu được lưu trữ và phân tích thống kê bằng phần mềm SPSS 22.0. Kết quả được biểu diễn dưới dạng M± SE (M: giá trị trung bình từng lô, SE: sai số chuẩn). So sánh giá trị trung bình giữa lô dùng mẫu thử với lô chứng bằng t-test Student. Sự khác biệt giữa các lô được coi là có ý nghĩa thống kê khi p < 0,05.
Chương 3
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.1 Chế tạo module và kit tổng hợp dược chất phóng xạ18F-NaF
3.1.1 Chế tạo bộ kit tổng hợp18F-NaF
Căn cứ vào các bước điều chế 18F-NaF như sơ đồ 1.6 và dựa trên cơ sở bộ kit tổng hợp11C-Choline của hãng Bioscan–Mỹ, chúng tôi ngắt bỏ van số 1 và cắt đôi ở vị trí giữa van số 2 và số 3 từ trái sang phải để lắp cột QMA trong quá trình tổng hợp và sử dụng xi lanh P1 và P2 lắp vào vị trí số 3 và số 4 từ trái sang phải, thu được bộ kit tổng hợp18F-NaF.
Bộ kit mới có các van ba chiều được tích hợp với các mô tơ điều khiển của module và có hình dạng như hình 3.1