L ỜI MỞ ĐẦU
2.6. Phương pháp định tính các thành phần trong dịch chiết lá Trầu không
Định tính Alkaloids
Cho vào ống nghiệm 3ml dịch chiết, sau đó cho từ từ thuốc thử theo thành ống nghiệm để yên, quan sát. Dùng thuốc thử Wagner.
Thuốc thử Wagner:
- I2 1,27g - KI 2 g
- H2O vừa đủ 100 ml
Nếu có alkaloid sẽ xuất hiện tủa màu nâu. Định tính Flavonoids
Cho 3 ml dịch chiết vào trong 2 ống nghiệm. Phương pháp này gồm thử nghiệm với dung dịch NaOH 10% và thử nghiệm với dung dịch FeCl3[11].
- Thử nghiệm NaOH 10%: Thêm 2 ml dung dịch NaOH 10% vào 3 ml hỗn hợp rồi lắc đều. Nếu thấy xuất hiện dung dịch màu vàng rồi chuyển sang không màu nếu cho acid hydrochloric vào chứng tỏ có sự hiện diện của flavonoids trong dịch chiết.
- Thử nghiệm FeCl3: Nhỏ 3 giọt dung dịch FeCl3 bão hòa vào 3 ml hỗn hợp rồi lắc đều. Sự chuyển màu của dung dịch sang màu xanh đen chứng tỏ có tồn tại flavonoids trong dịch chiết. Định tính Anthraquinones Phản ứng Bomtra eger: - Dịch chiết 10ml - HCl 4N 4ml - FeCl3 20% 4ml
Lắc với 5ml ether, lấy lớp dịch ở trên. Hút 1ml dịch vừa chiết được cho vào ống nghiệm, thêm từ từ từng giọt đến hết 1ml dung dịch NaOH 10% lắc nhẹ. Phản ứng dương tính khi lớp kiềm có màu đỏ sim.
Định tính Steroid
Cho 3 ml dịch chiết vào trong 2 ống nghiệm. Phương pháp này thử nghiệm với thuốc thử Salkowski.
Thuốc thử Salkowski: H2SO4 đậm đặc, nhỏ từ từ vào 3ml dịch chiết Nếu xuất hiện màu đỏđậm, xanh, xanh tím là phản ứng dương tính.
Định tính Saponin
- Thử nghiệm 1: Lấy 1ml dịch chiết cho vào 2 ml dung dịch NaCl rồi lắc đều sau đó hút 2 ml hỗn hợp cho vào ống nghiệm rồi thêm 3 giọt máu động vật bằng ống tiêm rồi nhẹ nhàng đảo ngược ống (không tạo rung) và để yên trong 15 phút. Sự lắng xuống của các tế bào hồng cầu chứng tỏ có sự hiện diện của saponin trong dịch chiết [9].
- Thử nghiệm 2: Lấy 3ml dịch chiết hòa tan trong một ít nước cất sau đó lắc mạnh trong 30 giây và để yên hỗn hợp trong vòng 30 phút. Nếu có sự hình thành của bọt khí không tan chứng tỏ có sự hiện diện của saponin trong dịch chiết [9].
Định tính Tanin
Lấy 2ml dịch chiết hòa tan trong 10 ml dung dịch cồn 50%. Hút 4ml hỗn hợp vừa pha cho vào ống nghiệm:
- Thử nghiệm FeCl3: Nhỏ 3 giọt dung dịch FeCl3 vào phần thứ nhất, màu sắc của mẫu chuyển sang màu xanh lam hoặc màu xanh đen đậm chứng tỏ mẫu có tồn tại tannin [10].
2.7. Phương pháp xác định tỷ lệ khối lượng tinh dầu [5]
Tinh dầu sau khi chưng cất, để lắng hỗn hợp trong ống ngưng tụđến khi tách hẳn thành 2 pha riêng biệt. Pha nằm phía trên là tinh dầu, pha phía dưới là nước. Đọc thể tích tinh dầu trên ống ngưng tụ có vạch đo thể tích. Rồi tiến hành xác định tỉ lệ khối lượng tinh dầu tách chiết được.
Tỉ lệ khối lượng tinh dầu thu được theo công thức:
η = 𝑉𝑇𝐷 .𝑑𝑇𝐷
Trong đó:
η : Tỷ lệ khối lượng thu hồi tinh dầu (%) 𝑉𝑇𝐷 : thể tích tinh dầu thu được (ml)
𝑑𝑇𝐷 : tỷ trọng của tinh dầu (g/ml)
𝑚𝑁𝐿 : khối lượng nguyên liệu đem đi chưng (g)
2.8. Phương pháp xác định, định danh các cấu tử, thành phần hóa học có trong tinh dầu lá Trầu không