C. Cách nuôi trẻ
18.Phương pháp xác định hàm lượng vitamin B
Hàm lượng vitamin B1 trong sữa được xác định trên hệ thống sắc ký lỏng với detector huỳnh quang, theo phương pháp AOAC 986.27/HTP.PP.09 (đã được công nhận VILAS theo tiêu chuẩn ISO/IEC 17025) [17].
19.Phương pháp xác định hàm lượng vitamin B2
Hàm lượng vitamin B2 trong sữa được xác định theo phương pháp của Vinas và CS [18], tóm tắt như sau:
Cân 1-2g mẫu vào ống chiết PE ↓
Thêm 10ml ACN, siêu âm 10 phút ↓
Thêm 10ml đệm phosphat 10mM, pH 5,0, lắc đều ↓
Ly tâm 6000 rpm, 5 phút ↓
Pha loãng dịch chiết đến 25ml bằng đệm phosphat ↓
Lọc qua màng 0.45 µm, lọc và bơm vào HPLC - Điều kiện sắc ký: o Cột Symmetry Shield RP18 o Pha động: Methanol: 10mM KH2PO4 (5:95), pH = 5.0 o Flow = 1ml/min o Detector huỳnh quang: Ex = 270nm, Em = 516nm
20.Phương pháp xác định hàm lượng vitamin B6
Vitamin B6 được xác định theo phương pháp của Mann và CS [19], tóm tắt như sau: Cân 25g mẫu đồng nhất vào bình nón 50 mL
↓
Thêm các thuốc thử vào dd mẫu và dung dịch chuẩn theo thứ tự sau: - 2.0 mL 0.625M sodium acetate solution
- 2.5 mL 1M glyoxylic acid
- 0.8 mL 10 g L−1 ferrous sulfate solution - 1.0 mL 20 mg mL−1 acid phosphatase solution
↓
Thêm 4 viên đá bọt 6mm vào từng bình nón ↓
Lắc qua đêm ở 370C (hoặc ít nhất 12h) đểđảm bảo khử hết nhóm phosphate ↓
Để nguội, chuyển kết vào bình định mức 50ml ↓
Pha loãng đến vạch bằng nước khử ion và trộn đều ↓
Lọc qua giấy lọc Whatman No. 40 hoặc tương đương ↓
Bỏ 10ml dịch lọc đầu tiên, lấy 5 ml dịch lọc trong vào cốc hoặc bình nón ↓
Thêm 4.5 mL 0.1M sodium borohydride solution, lắc nhẹ khoảng 20s ↓
Thêm 0.5 ml glacial acetic acid, lắc nhẹ 30s ↓
Khi hết sủi bọt, lọc lấy 2ml dịch chiết qua màng 0.45 µm và bơm vào HPLC
21.Phương pháp xác định hàm lượng vitamin B12
Vitamin B12 được xác định bằng sắc ký lỏng khối phổ theo phương pháp của Luo và CS [20], tóm tắt quy trình như sau:
Cân 15–30 g mẫu vào bình Erlenmeyer ↓
Thêm 40 mL 50 mM sodium acetate buffer, pH 4.0, 1 mL of 1% sodium cyanide (1.0%), 0.25 g α-amylase, 1 g pepsin
↓
↓ Để nguôi, điều chỉnh đến pH 4.8 ↓ Đun nóng đến100°C, để 35 phút ↓ Để nguội, định mức bằng nước cất đến 100ml ↓ (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Ly tâm, lọc qua màng 0.45 µm và bơm vào sắc ký lỏng
Điều kiện sắc ký:
Cột 15 cm × 3.9 mm
Pha động: water/acetonitrile Nhiệt độ buồng cột: 30oC Tốc độ dòng: 1 mL/phút
Detector : khối phổi ESI-MS, chếđộ ion dương.