1. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU
1.1. Phân lập và giám định vi rút viêm gan vịt
− Thu thập bệnh phẩm
− Phân lập và giám định vi rút
− So sánh kháng nguyên giữa chủng phân lập và chủng vi rút vác xin
1.2. Hồn thiện qui trình
− Hồn thiện qui trình ni cấy tế bào để sản xuất vác xin
− Hồn thiện qui trình kiểm nghiệm vác xin nhị giá viêm gan và dịch tả vịt
− Xây dựng qui trình bảo quản vận chuyển vác xin, kiểm tra độ dài bảo quản của vác xin sau 3, 6, 9, 12 tháng.
− Xây dựng phương pháp kiểm tra miễn dịch và theodõi đánh giá miễn dịch sau tiêm phòng.
− Đánh giá hiệu quả phòng bệnh trên thực tế sản xuất.
2. NGUYÊN VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 2.1. Mẫu bệnh phẩm 2.1. Mẫu bệnh phẩm
+ Mẫu được thu thập tại các đàn vịt nuôi tại: Long An, Đồng Nai, TP. Hồ Chí Minh, Cần thơ, Tiền Giang.
2.2. Giống vi rút
- Chủng vi rút cường độc viêm gan vịt phân lập trên đàn vịt tại một số tỉnh khu vực Đồng Bằng Sông Cửu Long.
- Giống vác xin dịch tả vịt thích ứng trên tế bào CEF (Chicken Embryo Fibroflasts) có TCID50 = 106,8 TCID50/ml
- Giống cường độc dịch tả vịt dùng kiểm nghiệm vác xin, có hiệu giá EID50 = 106, 4/ml
- Giống cường độc viêm gan vịt do Bộ môn vi sinh vật, trường đại học nông nghiệp Hà Nội cung cấp, EID50 = 10- 7, 7/ 0,2 ml, ELD50 = 10- 5,8/ 0,2 ml, LD50 = 10- 7, 5/ 0,5 ml (trên vịt 2 ngày tuổi).
Nghiên cứu vác xin Cairo – Ai Cập do Bộ môn Vi sinh vật - Truyền nhiễm (Trường
Đại học Nông nghiệp Hà Nội) cung cấp có ELD50=10-5,3 và EID50=10-7,87
2.3. Trứng vịt, gà có phơi
- Phơi vịt 12 -13 ngày tuổi, từ vịt mẹ chưa được tiêm vác xin viêm gan vịt từ trại vịt giống VIGOVA, Đồng Nai
- Phôi gà 9 – 10 ngày tuổi, từ đàn gà giống ISABROWN khỏe mạnh của trại gà
giống Hồng Sanh, Bình Dương.
2.4. Vịt thí nghiệm
- Vịt từ 1 – 7 ngày tuổi, khoẻ mạnh ấp nở từ đàn vịt bố mẹ giống siêu thịt trại vịt giống VIGOVA, Đồng Nai, chưa được miễn dịch đối với vi rút viêm gan vịt.
- Vịt tuổi 1 tháng đến 2 tháng tuổi, chưa tiêm vác xin hay khơng có kháng thể viêm gan và dịch tả vịt.
2.5. Mơi trường và hố chất thí nghiệm
- Môi trường nuôi cấy: Môi trường căn bản MEM (Minimum Essential Medium), hãng Sigma.
- Huyết thanh bê sơ sinh (Newborn Calf Serum), hãng Gibco, NewZealand. - Trypsin 0,25%, hãng Difco (Mỹ).
- Kháng sinh penicillin và streptomycin, hoặc penicillin và gentamycin. - Dung dịch PBS pH7.2. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Sodium bicarbonate 7,5% (NaHCO3)
2.6. Dụng cụ thí nghiệm và thiết bị
- Pince, kéo, kẹp, hộp lồng, ống nghiệm; Syring các loại 1 và 5ml; Dùi tiêm trứng;
Micropipette, multipipette, đầu tips, máng nhựa, đĩa nhựa 96 lỗ. - Pippett các loại; chai lọ có nút vặn 50, 100, 250, 500 ml..vv - Chai nhựa (T25, T75), vỉ nhựa (6 lỗ, 96 lỗ) dùng nuôi cấy tế bào.
- Các dụng cụ phải được xử lý vô trùng trước khi đưa vào sử dụng: bình chứa 1lít, 5 lít, bình khía có thanh nam châm, chai nhựa ni cấy tế bào, đĩa petri, cốc thủy tinh
100 ml, 500 ml, ống đong, kẹp, kéo, quặng thủy tinh, vải lọc, syringe 20ml, 50ml, kim lớn dài 10cm, bình ly tâm.
- Tủ ấp trứng, tủ ấm nuôi cấy tế bào, máy ly tâm lạnh, bể nước ấm 37oC, máy khuấy từ, kính hiển vi soi ngược, máy ra chai bán tự động, máy đông khô, máy dập nút, máy in nhãn, máy dán nhãn. đèn soi trứng, khay đựng trứng. Tủ lạnh dương, tủ lạnh âm, tủ
đông sâu, kho lạnh.
3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.
3.1. Phương pháp phân lập vi rút viêm gan vịt.
- Mẫu gan được nghiền nhỏ, pha với dung dịch PBS có chứa kháng sinh thành huyễn dịch 1/5, để ở nhiệt độ 4oC trong 2 giờ, sau đó ly tâm với tốc độ 5000 vịng/phút trong 15 phút. Lấy huyễn dịch ở trên xử lý bằng clorofoc 5% trong 10 phút. Thu nước
trong và đem cấy truyền trên phôi vịt ấp 13 ngày tuổi.