III/ KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM
ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯƠNG VÁCXIN NHỊ GIÁ DỊCH TẢ-VIÊM GAN VỊT
3.1. Đặt vấn đề
Trong sản xuất vác xin, đánh giá chất lượng của vác xin là một công việc quan trọng, và thông qua việc kiểm tra này chúng ta có thể đánh giá được: i/ chất lượng của vác xin sản xuất; ii/ Tính hợp lý của qui trình sản xuất và sự ổn định của quá trình sản
xuất.
Để kiểm nghiệm vác xin dịch tả vịt, người ta thường dùng hai phương pháp:
Chuẩn độ hàm lượng vi rút chứa trong vác xin hay đánh giá miễn dịch trên bản động vật bằng phương pháp gián tiếp hoặc trực tiếp. Theo một số nghiên cứu, để kiểm tra vác xin viêm gan vịt người ta có thể gây miễn dịch cho vịt con và thực hiện công cường độc hoặc gây miễn dịch cho vịt lớn (hoặc vịt đẻ) và đánh giá miễn dịch bằng phương pháp bảo hộ
gián tiếp trên vịt con.
Nhằm tìm ra một phương pháp thích hợp, có thể áp dụng để kiểm nghiệm vác xin nhị giá viêm gan, dịch tả vịt chúng tôi tiến hành nghiên cứu đánh giá một số phương pháp kiểm nghiệm chất lượng vác xin.
3.2. Vật liệu và phương pháp thí nghiệm
3.2.1. Vật liệu và động vật thí nghiệm + Vật liệu thí nghiệm
- Tế bào CEF
- Vác xin nhị giá đông khô
- Dung dịch đệm PBS pH = 7,2 chứa kháng sinh - Môi trường nuôi cấy tế bào MEM, huyết thanh bê
- Các dụng cụ thí nghiệm dùng cho nuôi cấy tế bào, chuẩn độ vi rút..vv - Huyết thanh thỏ tối miễn dịch với vác xin viêm gan vịt
+ Động vật thí nghiệm
- Vịt giống siêu thịt (VIGOVA, Đồng Nai) 2 -3 ngày tuổi, khỏe mạnh, chưa tiêm vác xin viêm gan vịt hoặc có nguồn gốc từ vịt giống không tiêm vác xin viêm gan vịt.
- Vịt cỏ (Cơ sở Ngọc Lợi, Quận 8) 1 – 1, 5 tháng tuổi, khỏe mạnh, chưa tiêm vác xin viêm gan vịt và dịch tả vịt.
- Vịt cỏ đẻ (Cơ sở Ngọc Lợi, Quận 8) khỏe mạnh chưa tiêm vác xin viêm gan vịt
3.2.2. Phương pháp thí nghiệm 3.2.2.1. Bố trí thí nghiệm
+ Thí nghiệm 1: Đánh giá tính an tồn của vác xin
Tính an tồn của vác xin được kiểm tra trên vịt 2 -3 ngày tuổi, với liều dùng gấp 10 và 100 lần liều dùng.
+ Thí nghiệm 2: Chuẩn độ vi rút trước và sau đơng khơ
Thí nghiệm này được thực hiện dựa trên đặc tính sinh học và khả năng trung hòa huyết thanh của các vi rút vác xin để loại bỏ vi rút vác xin còn lại, sau đó thực hiện phương pháp chuẩn độ vi rút trên môi trường nuôi cấy tế bào CEF.
- Để bất hoạt vi rút vác xin dịch tả vịt trong vác xin nhị giá, chúng tôi tiến hành xử lý mẫu vác xin bằng chloroform (5%) trong thời gian 15 phút.
- Đối với vi rút vác xin viêm gan vịt trong mẫu vác xin nhị giá, chúng tôi sử dụng kháng huyết thanh viêm gan vịt chế bằng phương pháp gây tối miễn trên thỏ phối trộn với vác xin với nồng độ thích hợp để loại bỏ.
Sau khi xử lý xong, mẫu được chuẩn độ vi rút theo như phương pháp thường qui. Tiến hành chuẩn độ các lô vác xin nhị giá thử nghiệm trước đông khô (chuẩn độ vác xin
đơn giá) và sau đông khô (chuẩn độ vác xin nhị giá). So sánh hiệu giá các vi rút vácxin đơn giá và nhị giá, trước và sau đơng khơ.
+ Thí nghiệm 3:Kiểm tra trên vịt 2-3 ngày tuổi
Tổng số 40 vịt 2- 3 ngày tuổi chia lam 4 lô, mỗi lô 10 vịt. Lô 1 và 3 tiêm vác xin nhị giá với 1 liều vác xin; lô 2 và 4 vịt không tiêm vác xin dùng làm đối chứng viêm gan và dịch tả vịt. Sau 11 – 12 ngày tiêm vác xin, lô 1 miễn dịch và lô 2 đối chứng được thử
thách vi rút VGV cường độc với liều 103 LD50/con, và lô 3 cùng với lô 4 sẽ công với vi rút DTV cường độc với liều 103EID50/con ở ngày 15 sau tiêm vác xin.
+ Thí nghiệm 4: Kiểm tra hiệu lực vác xin dùng trên vịt 1 – 1,5 tháng tuổi
16 vịt cỏ, 1-1,5 tháng tuổi được chia làm hai lô, mỗi lô 8 vịt. Vịt trước khi tiêm
dùng gây miễn dịch với vác xin nhị giá, liều 1 ml/con và lô 2, 6 vịt không tiêm vác xin dùng làm đối chứng.
Đánh giá miễn dịch dịch tả vịt: Sau miễn dịch 15 ngày, lấy máu vịt tất cả các lô để
đánh giá miễn dịch dịch tả vịt bằng ELISA, sau đó chọn ngẫu nhiên 5 vịt lơ 1 miễn dịch,
cùng 3 vịt lô đối chứng được thử thách với chủng vi rút dịch tả vịt cường độc, liều 103EID50/con.
Đánh giá miễn dịch viêm gan vịt: 3 vịt miễn dịch cịn lại của lơ miễn dịch được
tiêm nhắc lại với một liều vác xin nhị giá. Sau 15 ngày miễn dịch lần 2, 3 vịt miễn dịch và 3 vịt đối chứng còn lại được lấy máu để kiểm tra đáp ứng miễn dịch viêm gan vịt bằng phương pháp bảo hộ thụ động trên vịt con và phản ứng trung hòa trên tế bào. (sơ đồ thí nghiệm được trình bày ở bảng dưới)
Sau khi tiêm vác xin Lô TN Số vịt
tiêm
Số lần tiêm
Tách
lô 14 ngày 28 ngày
1 5 - ELISA DTV - Công CĐ DTV -