1 .4.CHEMOKINE CXCL2 VÀ VAI TRÒ TRONG UNG THƢ ĐẠI TRỰC
2.2.6. Điện di kiểm tra sản phẩm
Do tính chất tích điện âm của các phân tử acid nucleic nên dƣới tác dụng của dòng điện một chiều, các phân tử này sẽ chuyển động từ cực âm sang cực dƣơng. Tốc độ di chuyển của các phân tử này phụ thuộc chủ yếu vào kích thƣớc phân tử acid nucleic, nhờ đó mà những đoạn ADN khác nhau có khả năng phân biệt với nhau trên gel điện di. Gel điện di thƣờng sử dụng là agarose và polyacrylamide. Tùy vào kích thƣớc đoạn ADN muốn phân tách ngƣời ta sẽ sử dụng chúng ở những nồng độ khác nhau. Trong khuôn khổ luận văn này chúng tôi đã sử dụng 2 phƣơng pháp:
Điện di trên gel agarose 2%
Chuẩn bị gel agarose 2%: 2 gam agarose dạng bột (Invitrogen) đƣợc hòa tan trong 100ml đệm TBE 1X pH 8,3 (tris–base 0,09M, acid boric 0,09M, EDTA 4mM) đun bằng lò vi sóng cho đến khi agarose tan hết.
Đổ agarose vào khuôn điện di, chờ 15–20 phút cho gel đông lại.
Sản phẩm PCR đƣợc trộn với loading dye (glycerol 30% v/v, bromphenol blue dạng vết) và tra lên giếng điện di.
Bản gel sau điện di đƣợc nhuộm ethidium bromide trong 20 phút sẽ đƣợc quan sát dƣới đèn cực tím ở bƣớc sóng 245 nm.
Sau khi phân tích kết quả điện di trên gel agarose 2% có thể lựa chọn những mẫu nghi ngờ, khó xác định để điện di trên gel polyacrylamide 10% cho kết quả phân tích chính xác hơn. Bản gel đƣợc chuẩn bị với thành phần nhƣ sau (bảng 6):
Bảng 6. Thành phần bản gel polyacrylamide 10% (bản 7cm) Thành phần Thể tích Monoacrylamide 30% 1,65 ml TBE 3,31 ml APS 37,5 µl TEMED 3 µl
Tiến hành điện di ở 175V trong 1 giờ sau đó nhuộm bạc để phân tích kết quả.