V. CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH CHƠNG OXI CỦA CÁC DỊCH TRÍCH TỪ THựC VẬT
200 ml đệm acetate 20 ml TPTZ 20 ml FeCl3 24 ml nước cất
Chuẩn bị hàng ngày, bảo quản lạnh khi chưa sử dụng.
4.2. Cách thức tiến hành
Sau thời gian trích ly, đem các dịch trích đi ly tâm lạnh ở 4000 vịng trong thời gian 15 phút. Mục đích của ly tâm lạnh là tăng cường khả năng kết lắng của các tạp chất và giảm độ bay hơi cho dung môi để kết quả đo đạt được chính xác.
Sau khi ly tâm, dùng micripipette hút lml dịch trích cho vào ống nghiệm, tiến hành pha lỗng dịch trích trong nước đến nồng độ thích hợp.
Sau khi pha lỗng, dùng micropipette hút lml dịch trích cho vào ơng nghiệm, thêm vào đó 2 ml tác nhân FRAP + 2ml nước cất. Để hỗn hợp phản ứng trong lh rồi đem đi đo độ hấp thu ở bước sóng 593nm.
Chuẩn bị mẫu trắng: mẫu trắng chỉ chứa 2ml tác nhân FRAP + 3ml nước cất.
Chuẩn bị mẫu đối chứng(cQx\ưo\y. mẫu đơi chứng được chuẩn bị như mẫu thí nghiệm
nhưng thay lml mẫu thí nghiệm bằng lml dung mơi. Chú ý rằng, nếu dịch trích pha lỗng trong nước bao nhiêu lần thì dung mơi cũng phải pha lỗng trong nước bấy nhiêu lần, nghĩa là hệ sơ" pha lỗng của dung mơi phải bằng hệ số pha lỗng của dịch trích.
Đơi với các dịch trích trong dung mơi diethyl ether là q trình chuẩn bị khác đi một ít. Dịch trích này được pha loãng trong diethyl ether đến nồng độ thích hợp rồi hút lml dịch trích này cho vào ơng nghiệm, thêm vào 2ml tác nhân FRAP, lắc mạnh, rồi thêm vào 2ml dung môi diethyl ether. Để hỗn hợp phản ứng trong lh rồi đem đi đo quang phổ. Mau đôi chứng gồm lml diethyl ether + 2ml tác nhân FRAP + 2ml nước cât.
STT Mẩu trắn g 1 2 3 4 5 6 Mẫu 1 Mẩu 2 Mẩu đôi chứ n ơ & Vchuẩn(ml) 0,1 0,2 0,4 0,6 0,8 1 V mẫu(rnl) 1 1 Vdung môi(ml) 1 VH2o(ml) 3 2,9 2,8 2,6 2,4 2,2 2 2 2 2 VFRAP(HII) 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 OD (593 nm) 4.3. Cơng thức tính
Từ kết quả đo dung dịch chuẩn, dựng đường chuẩn Fe2+ y= f(x) với y là mật độ quang, X là nồng độ Fe2+ (mmol Fe2+/L). Tính độ lệch chuẩn R2 của đường chuẩn. Dựa vào đường chuẩn, tính nồng độ Fe2+ trong mẫu đo quang học M (mmol Fe2+/L). Hoạt tính chồng oxi hóa trong ngun liệu được tính như sau:
AA _ M.f.v Too
1000 'm.(l 00-00
AA: hoạt tính chơng oxi hóa trong ngun liệu (mmol Fe2+/g chất khô)
M: nồng độ Fe2+ trong mẫu đo quang học = hoạt tính chơng oxi hóa trong mẫu đo quang học (mmol Fe2+/L) f: hệ sơ" pha lỗng
V: thể tích dung mơi dùng trích ly chất chơng oxi hóa (ml) m: khơi lượng mẫu đcm trích ly (g)
W: độ ẩm mẫu (%).
Chứ ý: Khi trích ly, khơng thể nào tồn bộ các chất chơng oxi đều đi vào dung mơi. Vì thế, cơng thức trên khơng xác định giá trị thực sự hoạt tính chơng oxi hóa trong ngun liệu mà chỉ là gần đúng.