Phương pháp xác định hàm lượng protein
Tiến hành theo phương pháp Lowry O.H (1951). Bước 1: chuẩn bị dung dịch NaOH 0,1N
Dung dịch A (Na2CO3 2% + Na-K-tatrate 0,05% + NaOH 0,1 N) Dung dịch B (CuSO4 0,1%).
Dung dịch C (A:B = 45:5) Dung dịch Folin 1 N Bước 2: chuẩn bị mẫu
Cân 10 mg nội nhũ đã nghiền mịn cho vào ống 1,5 ml, thêm vào 1 ml NaOH 0,1 N, khuấy đều và để qua đêm.
Bước 3: Pha loãng mẫu và đo
Wortex mẫu sau đó ly tâm ở tốc độ 14000 vòng/phút trong 3 phút
Hút 100 µl dịch trích cho vào ống 10 ml đối với mẫu thử. Đối với mẫu blank, thay dịch trích bằng NaOH 0,1 N.
Thêm 1 ml nước cất, lắc đều.
Thêm 500 µl dung dịch C (chỉ pha trước khi sử dụng 30 phút), lắc đều và để yên trong 10 phút.
Thêm 50 µl Folin 1N, lắc đều và để yên trong 30 phút. Sau đó cho vào cuvette và đo ở bước sóng 600 nm.
Bước 4: Dựng đường chuẩn và tính kết quả
Pha dung dịch gốc Bovine serum albumin (BSA). Đường chuẩn có dạng:
Y= aX + b
Trong đó Y: Độ hấp thụ OD
X: Nồng độ protein có trong mẫu đem đo (mg/ml). Hàm lượng protein được tính theo cồng thức: %protein = 10x100
m x
Phương pháp xác định độ bền gel:
Theo phương pháp của Tang et al. (1991). Bước 1: Chuẩn bị mẫu
Tách vỏ trấu và đo ẩm độ hạt gạo. Nghiền mịn và cân mẫu:
Trọng lượng mẫu 14 100 %) 100 ( 10 x H m
H%: ẩm độ của mẫu lúc đem phân tích Bước 2: Hòa tan mẫu
Thêm 2 ml KOH 0,2 N. Sau đó khuấy đều mẫu bằng máy Vortex
Đậy nấp kỹ và đun trong nồi cách thủy (nhiệt độ khoảng 1000C) khoảng 5 phút.
Lấy ra để yên khoảng 8 phút và sau đó làm lạnh trong nồi nước đá khoảng 20 phút.
Bước 3: Đọc và ghi kết quả
Để ống nghiệm nằm ngang trên bề mặt phẳng, để gel chảy từ từ, sau 1-2h tiến hành đo chiều dài thể gel (từ đáy đến mí trên của thể gel).
Đánh giá độ bền thể gel theo thang điểm của IRRI (1996) như được trình bày ở bảng sau
Bảng 2.4 Phân cấp độ bền thể gel theo thang đánh giá của IRRI (1996)
Cấp Chiều dài thể gel (mm) Loại độ bền gel
1 81 – 100 Rất mềm 3 61 – 80 Mềm 5 41 – 60 Trung bình 7 35 – 40 Cứng 9 < 35 Rất cứng Phương pháp xác định cấp trở hồ
Theo phương pháp của IRRI (1979).
Chuẩn bị hai mẫu cho mỗi giống/dòng được thử. Mỗi mẫu lấy sáu hạt, cạo sạch lớp cám, chọn hạt không bj nứt, để vào dĩa petri.
Thêm 10 ml KOH 1,7% vào mỗi dĩa.
Đậy dĩa petri, để yên khoảng 23 giờ ở nhiệt độ phòng.
Đánh giá độ lan rộng và độ trong suốt của hạt gạo theo thang điểm của IRRI (1986) được trình bày ở Bảng 2.5
Bảng 2.5 Phân cấp độ trở hồ (IRRI, 1979) Cấp Độ lan rộng 1 2 3 4 5 6 7 Hạt gạo còn nguyên Hạt gạo phòng lên
Hạt gạo phòng lên; viền còn nguyên hay rõ nét. Hạt gạo phòng lên; viền còn nguyên và nở rộng. Hạt rã ra; viền hoàn toàn nở rộng.
Hạt tan ra hòa chung với viền.
Hạt tan hoàn toàn và quyện vào nhau.
Cấp trung bình sẽ được tính theo công thức: Cấp trở hồ =
Trong đó: : cấp độ trở hồ. n: số hạt có cấp độ trở hồ N: số hạt thử nghiệm.
Bảng 2.6 Cấp độ trở hồ được đánh giá theo thang điểm của IRRI (1979)
Cấp Độ trở hồ
1 – 3 Cao
4 – 5 Trung bình
6 – 7 Thấp
Phương pháp xác định hàm lượng amylose
Tiến hành theo phương pháp Cagampang and Rodriguez (1980). Bước 1: chuẩn bị dung dịch
Ethanol 95%. HCl 30%. NaOH 1N.
Dung dịch Iod (0,2% I2 và 2% KI ). Bước 2: chuẩn bị mẫu.
Cà mẫu mịn
Cân 50mg mẫu (cân điện tử), cho vào ống 50ml.
Thêm 0,5 ml ethanol 95%, đậy nắp ngay, lắc nhẹ cho tan đều. Thêm 9,5ml NaOH 1N. Đun sôi trong 10 phút và lắc đều.
Để qua đêm ở nhiệt độ phòng. Wortext mẫu trước khi hút dịch trích. Bước 3: Pha loãng và đo mẫu
Rút 100µl dịch trích cho vào bình định mức 25ml (đối với mẫu thử thay dịch trích bằng 100µl NaOH 1N).
Thêm nước cất khoảng ½ lắc đều. Thêm 250 µl HCl 30%, lắc đều. Thêm 250 µl dung dịch Iod, lắc đều. Thêm nước cất đến vạch định mức.
Chuyển sang ống 50 ml, lắc đều và để yên trong 30 phút.
Lắc đều trước khi cho vào cuvette. Đo độ hấp thu ở bước sóng 580nm. Bước 4: Dựng đường chuẩn và tính kết quả.
Đường chuẩn có dạng: Y = aX + b
Trong đó Y: Độ hấp thu OD
X: Lượng amylase có trong mẫu đem đo (mg/ml). Tính hàm lượng amylase theo công thức:
% Amylose = 14 100 %) 100 ( 10 x H m 14 100 %) 100 ( 50 x H
Bảng 2.7 Đánh giá hàm lượng amylose theo thang đánh giá của IRRI (1988)
Nhóm Phân loại Hàm lượng amylose (%)
Gạo nếp Gạo dẻo 0-2
Rất thấp Dẻo trung bình 3-9
Thấp Dẻo trung bình 10-19
Trung bình Cứng cơm 20-25
cao Rất cứng cơm >25
Phương pháp phân loại chiều dài và hình dạng hạt gạo (khush and Paul, 1979)
Để đo chiều dài hạt gạo dung giấy kẻ li đo nhiều lần. mỗi dòng lấy 10 hạt gạo.
Bảng 2.8 Phân loại theo số đo chiều dài/rộng hạt gạo (Tiêu chuẩn Việt Nam, 2001)
Kích thước Chiều dài (mm) Cấp Hình dạng hạt Tỷ lệ dài/rộng Cấp
Rất dài >7,5 1 Thon dài >3,0 1
Dài 6,61 - 7,5 3 Trung bình 2,1 - 3,0 3
Trung bình 5,51 - 6,6 5 Bầu 1,1-2,0 5
Ngắn <5,5 7 tròn <1,0 7