Định tính và định lƣợng bạc bằng phƣơng pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử dùng kỹ thuật nguyên tử hóa mẫu bằng ngọn lửa đèn khí.
Đây là phƣơng pháp phân tích có độ chính xác cao, độ lặp lại rất tốt và độ nhạy cao nên rất thích hợp để phân tích các chế phẩm chứa bạc ở dạng nano. Bạc là nguyên tố dễ hòa tan trong dung dịch acid nitric để tạo thành muối bạc nitrat, acid nitric là hóa chất sẵn có ở các phòng thí nghiệm, việc xử lý mẫu cũng tƣơng đối đơn giản khi dùng acid nitric 1% làm môi trƣờng hòa tan. Sử dụng acid nitric nồng độ thấp sẽ hạn chế sự bay hơi, độc hại và đồng thời nồng độ acid càng bé sẽ giảm ảnh hƣởng hóa học của phép đo quang phổ hấp thụ nguyên tử.
Phƣơng pháp này cho độ nhạy cao, định lƣợng các nguyên tố ở dạng vết, chính vì vậy trƣớc mỗi lần khảo sát hay đo độ hấp thụ của các mẫu thử, mẫu chuẩn khoảng tuyến tính đều đƣợc xác định, nhằm tránh hiện tƣợng sai số điểm. Và trƣớc khi tiến hành pha các dung dịch chuẩn và các dung dịch thử, cần cho dung dịch acid nitric 10% tinh khiết AAS vào các bình sẽ pha mẫu, lắc sau đó ngâm 30 phút, rồi tráng lại bằng nƣớc trao đổi ion 3 lần.
Phƣơng pháp đƣợc thẩm định theo hƣớng dẫn của ASEAN, AOAC và các tài liệu chuyên ngành của Viện Kiểm nghiệm Thuốc Trung ƣơng với các chỉ tiêu: tính đặc hiệu, tính thích hợp hệ thống, khoảng nồng độ tuyến tính, độ đúng, độ lặp lại. Các kết quả thu đƣợc đạt yêu cầu và đảm bảo cho việc phân tích bạc một cách chính xác trong các chế phẩm nghiên cứu. Tuy nhiên, phƣơng pháp đánh giá độ đúng đối với mẫu hỗn dịch bằng cách chuẩn bị mẫu tự tạo chƣa thật sự phù hợp, nhƣng do trên thị trƣờng không có mẫu hỗn dịch nano bạc chuẩn nên việc sử dụng các phƣơng pháp nhƣ thêm chuẩn gặp khó khăn. Vì vậy, phƣơng pháp chuẩn bị mẫu tự tạo đã đƣợc sử dụng để tiến hành khảo sát độ đúng đối với mẫu hỗn dịch.
Chỉ tiêu định tính và định lƣợng bằng quang phổ AAS rất quan trọng trong việc xác định sự có mặt của bạc và hàm lƣợng bạc tổng (bạc ở dƣới dạng ion và
- 61 -
dạng nguyên tử) có trong các chế phẩm. Một số nghiên cứu về xây dựng tiêu chuẩn cho nh ng sản phẩm tƣơng tự nhƣ: gel rửa tay nano bạc cũng đƣa ra chỉ tiêu này [18]. Tuy nhiên, phƣơng pháp AAS để định lƣợng Ag không đảm bảo tính đặc hiệu vì không phân biệt đƣợc lƣợng Ag0
và Ag+. Vì vậy, để xác định đƣợc hàm lƣợng bạc ở dạng nano (bạc nguyên tử) thì cần có chỉ tiêu xác định lƣợng ion bạc dƣ trong chế phẩm.
4.2. VỀ XÁC ĐỊNH HÌNH DẠNG VÀ KÍCH THƢỚC TIỂU PHÂN NANO BẠC Chỉ tiêu xác định hình dạng và kích thƣớc tiểu phân nano bạc là rất quan trọng đối với quá trình bào chế cũng nhƣ kiểm nghiệm. Điều này cho phép đánh giá quy trình bào chế đã đạt yêu cầu và chất lƣợng của chế phẩm đã thực sự đạt kích thƣớc nano hay chƣa. Phƣơng pháp sử dụng kính hiển vi điện tử quét (Scanning Electron Microscope, SEM), loại kính hiển vi tạo ảnh với độ phân giải cao nhờ chùm điện tử hẹp quét trên bề mặt mẫu, độ phóng đại 20 – 800000 lần. Việc tạo ảnh mẫu vật đƣợc thực hiện bằng ghi nhận và phân tích bức xạ phát ra từ tƣơng tác của chùm điện tử với bề mặt mẫu vật. Từ hình ảnh chụp đƣợc có thể xác định đƣợc kích thƣớc và hình dạng của các tiểu phân nano bạc.
Đây là phƣơng pháp đƣợc sử dụng rất nhiều trong khoa học vật liệu, trong luyện kim và trong sinh học. Với các tính năng nhƣ: quan sát bề mặt mẫu rắn ở các độ phóng đại khác nhau, độ sâu trƣờng quan sát lớn hơn rất nhiều so với kính hiển vi quang học, cho phép thu ảnh lập thể, kết hợp với đầu thu phổ tán xạ năng lƣợng tia X (EDX) cho phép phân tích thành phần nguyên tố của vùng quan sát. Một nhƣợc điểm của SEM là đôi khi hình ảnh còn chƣa sắc nét. Để tăng độ phân giải cho hình ảnh, khả năng quan sát rõ hơn thì ngƣời ta sử dụng kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM) sẽ cho kết quả tốt hơn, nhƣng thiết bị TEM đắt tiền hơn SEM nên còn chƣa đƣợc phổ biến.
Đề tài cũng đã áp dụng phƣơng pháp đánh giá kích thƣớc và hình dạng tiểu phân nano bạc bằng kính hiển vi điện tử quét để khảo sát ảnh hƣởng của một số yếu tố trong quá trình bào chế tới hình dạng, kích thƣớc tiểu phân nano bạc bao gồm: Tỷ lệ nồng độ AgNO3 và PVP - K30, tốc độ khuấy dung dịch AgNO3, tốc độ bơm
- 62 -
NaBH4 để nhằm thiết lập đƣợc quy trình bào chế hỗn dịch nano bạc 1000 ppm ổn định về nồng độ, kích thƣớc, hình dạng của nano bạc.
Chỉ tiêu xác định hình dạng và kích thƣớc tiểu phân là rất quan trọng đối với một sản phẩm nano, nó cho biết các tiểu phân bạc đã đạt đƣợc kích thƣớc nano hay chƣa, từ đó ảnh hƣởng đến tác dụng diệt khuẩn của chế phẩm. Sử dụng kính hiển vi điện tử quét (SEM) để xác định hình dạng và kích thƣớc tiểu phân cho kết quả chân thực và chính xác về hình ảnh các tiểu phân. Tuy nhiên, việc sử dụng SEM gặp khó khăn bởi vì hiện nay các đơn vị kiểm nghiệm hầu nhƣ chƣa đƣợc trang bị. Một số kỹ thuật có thể xác định kích thƣớc hạt nano bạc nhƣng với độ chính xác kém hơn SEM nhƣ: quang phổ UV-VIS, tán xạ ánh sáng động (DLS).