Để đảm bảo phƣơng pháp phân tích đạt yêu cầu quy định, chúng tôi đã tiến hành thẩm định các chỉ tiêu độ phù hợp hệ thống, tính chọn lọc, độ đúng độ chính xác, khoảng tuyến tính.
a. Tính thích hợp hệ thống
Kết quả thẩm định tính thích hệ thống cho thấy RSD % của thời gian lƣu và diện tích píc 2 hoạt chất từ 0,24 % đến 1,65 %, đạt so với yêu cầu < 2%. Điều này chứng tỏ hệ thống sắc ký phù hợp cho việc định lƣợng đồng thời PSE và LOR.
Trong thẩm định tính thích hợp hệ thống, chúng tôi không đánh giá độ phân giải của 2 píc (Rs) do 2 píc tách nhau rõ rệt.
b. Độ chọn lọc
đƣợc cung cấp. Điều này đảm bảo công thức bào chế và phƣơng pháp placebo hoàn toàn giống với mẫu thử, chỉ khác không có hoạt chất. Do đó đƣờng nền trên sắc ký đồ của mẫu thử và mẫu placebo là nhƣ nhau.
Tại vị trí tƣơng ứng với thời gian lƣu của PSE và LOR trên sắc ký đồ mẫu placebo không xuất hiện píc lạ. Píc của các hoạt chất đều gọn, cân xứng. Do đó phƣơng pháp có tính chọn lọc cao.
c. Độ tuyến tính
Chúng tôi đã xây dựng khoảng tuyến tính đủ rộng để ứng dụng đánh giá nhiều chỉ tiêu về hàm lƣợng. Khoảng nồng độ tuyến tính của nghiên cứu này có biên độ dƣới thấp hơn nhiều so với các nghiên cứu khác ([8], [14], [27], [34]). Điều này là phù hợp với mục tiêu đánh giá nhiều chỉ tiêu hàm lƣợng nhƣ đã nói, đặc biệt là mục tiêu đánh giá giải phóng hoạt chất in vitro
đòi hỏi nồng độ định lƣợng thấp và khoảng tuyến tính rộng ( từ 5% đến 125% nồng độ định lƣợng).
Trong khoảng nồng độ tuyến tính 6,30 – 167,50 µg/ml đối với PSE và 0,25 – 6,64 µg/ml đối với LOR, hệ số tƣơng quan hồi quy xấp xỉ 1, điều này cho thấy có sự tƣơng quan tuyến tính chặt chẽ giữa diện tích píc với nồng độ của hai hoạt chất.
d. Độ chính xác
Kết quả thẩm định độ chính xác (bao gồm cả độ lặp lại và độ chính xác khác ngày) cho giá trị RSD % về hàm lƣợng so với nhãn đều < 2%. Bên cạnh đó chúng tôi đã sử dụng test thống kê t-test để kiểm tra sự khác biệt về hàm lƣợng % giữa các ngày và cho giá trị p-value > 0,05. Điều này cho thấy sự
khác biệt về hàm lƣợng giữa kết quả giữa hai ngày là không có ý nghĩa thống kê. Do đó phƣơng pháp có độ chính xác cao.
e. Độ đúng
Kết quả thẩm định độ đúng cho tỷ lệ thu hồi trong khoản từ 98 % - 102 %, đáp ứng yêu cầu về độ đúng của phƣơng pháp trong phân tích chế phẩm.