trong viên phóng thích có kiểm soát
2.3.2.1. Độ đồng đều hàm lượng
Tiến hành theo chuyên luận “Độ đồng đều hàm lƣợng” của DĐVN 4. Xác định hàm lƣợng LOR trong 10 viên (làm riêng rẻ) theo phƣơng pháp định lƣợng đã xây dựng. Tính hàm lƣợng trung bình của LOR trong 10 viên. Kết quả đạt nếu không có viên nào có hàm lƣợng LOR nằm ngoài khoảng 85 % đến 115 % hàm lƣợng trung bình.
Nếu có 1 viên có giá trị hàm lƣợng LOR nằm ngoài khoảng 85 %-115 % nhƣng nằm trong khoảng 75 %-125 % của hàm lƣợng trung bình thì tiến hành thử lại với 20 viên khác. Kết quả là đạt nếu có không quá 1 viên trong số 30 viên thử có hàm lƣợng LOR nằm ngoài khoảng 85 %-115 % nhƣng nằm trong khoảng 75 %-125 % của hàm lƣợng trung bình[1].
2.3.2.2. Định lượng
Xác định hàm lƣợng PSE và LOR trong chế phẩm thử bằng phƣơng pháp định lƣợng đồng thời PSE và LOR đã xây dựng ở trên.
Cân chính xác 20 viên, tính khối lƣợng trung bình viên. Nghiền mịn. Cân chính xác một lƣợng bột viên tƣơng ứng khoảng 120 mg PSE cho vào bình định mức 100,00 ml, thêm khoảng 60 ml MeOH, siêu âm trong 15 phút. Thêm MeOH đến vạch, lắc đều. Ly tâm 5000 vòng/phút. Lấy chính xác 10 ml dịch trong ở trên cho vào bình định mức 100 ml, pha loãng bằng pha động đến vừa đủ thể tích. Lắc đều. Lọc qua màng lọc 0,45 μm. Tiến hành lặp lại 3 lần. Song song làm một mẫu chuẩn có cùng nồng độ.
Tính hàm lƣợng mỗi hoạt chất trong chế phẩm dựa vào diện tích píc của PSE và LOR trong sắc ký đồ của mẫu thử, mẫu chuẩn và lƣợng PSE và LOR trong mẫu chuẩn.
Yêu cầu : Hàm lƣợng trung bình của LOR nằm trong khoảng 90 % - 110 % và hàm lƣợng trung bình của PSE nằm trong khoảng 95 % - 105 % [1].
2.3.2.3. Độ hòa tan
a. Phương pháp thử
-Môi trƣờng hòa tan: 2 môi trƣờng : dung dịch HCl 0,1N (dịch dạ dày pH 1,0) và dung dịch đệm hydrophosphat – dihydrophosphat pH 8,2 0,05, thêm enzym trypsin với nồng độ 0,05g/l (dịch ruột). Môi trƣờng đệm pH 8,2 đƣợc pha bằng cách hòa tan 0,523 g kali dihydrophosphat và 16,73 g dikali hydrophosphat trong nƣớc vừa đủ 1000 ml. Chế phẩm đƣợc thử trong môi trƣờng dịch dạ dày ở giờ thứ nhất, sau đó chuyển sang môi trƣờng dịch ruột.
-Tốc độ khuấy: 100 vòng/phút.
-Xác định phần trăm LOR và PSE giải phóng trong môi trƣờng dịch dạ dày sau 1h, phần trăm PSE giải phóng trong môi trƣờng dịch ruột tại giờ thứ 2, thứ 5 và thứ 6 bằng phƣơng pháp định lƣợng đã xây dựng [24].
b. Yêu cầu
Lƣợng dƣợc chất giải phóng tại các thời điểm phải đạt yêu cầu ở bảng 2.1 [24]
Bảng 2.1: Yêu cầu về độ hòa tan của chế phẩm Clatadin B Phần trăm LOR
giải phóng
Phần trăm PSE giải phóng
Giai đoạn môi trƣờng dịch vị
Giờ 1
85 % 60 %
Giai đoạn môi trƣờng dịch ruột
Giờ 2 65 %
Giờ 5 65 %
Giờ 6 85 %
2.3.2.4. Đánh giá giải phóng hoạt chất in vitro viên phóng thích có kiểm soát chứa PSE và LOR
Viên thử và viên đối chiếu đƣợc đánh giá độ hòa tan trong 3 môi trƣờng : đệm pH 1,2 ; đệm pH 4,5 và đệm pH 6,8. Mỗi môi trƣờng thử 12 viên.
- Thiết bị : Máy đo độ hòa tan Pharmatest kiểu cánh khuấy kết nối với bơm nhu động ISMATEC IPC và bộ phận lấy mẫu tự động Pharmatest PTFC II.
- Thể tích môi trƣờng: 900mL. - Chuẩn bị môi trƣờng:
o Dung dịch đệm pH 1,2: Hòa tan 2,0 g NaCl vào 200 ml nƣớc và thêm 7ml dung dịch HCl đậm đặc, thêm nƣớc vừa đủ 1000 ml, chỉnh về pH 1,2 bằng HCl.
o Dung dịch đệm pH 4,5: Hòa tan 6,805 g kali dihydrophosphat trong nƣớc vừa đủ 1000 ml, chỉnh đến pH 4,5 bằng acid phosphoric.
o Dung dịch đệm pH 6,8: Hòa tan 6,805 g kali dihydrophosphat và
0,896 g NaOH trong 900 ml nƣớc, khuấy tan rồi thêm nƣớc vừa đủ 1000 ml, điều chỉnh về pH 6,8 bằng dung dịch NaOH 1M. - Tốc độ khuấy : 100 vòng/phút.
- Nhiệt độ : 37 0,5 0C.
- Thời gian thử : 12h, lấy mẫu định lƣợng tại các thời điểm 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12h.
- Mẫu đƣợc lọc qua màng 0,45μm và định lƣợng đồng thời PSE và LOR bằng phƣơng pháp HPLC.
- Xây dựng đồ thị giải phóng hoạt chất của chế phẩm thử và chế phẩm đối chiếu.
- Xác định giá trị RSD của % giải phóng hoạt chất của chế phẩm thử và chế phẩm đối chiếu ở các thời điểm lấy mẫu. Đánh giá mức độ tƣơng đồng của đồ thị giải phóng hoạt chất hai chế phẩm qua hệ số f2. [19]