* Kết quả tách ADN tổng số của vi khuẩn S.aureus
Chúng tôi đã tiến hành tách chiết ADN tổng số của vi khuẩn tụ cầu theo quy trình tách chiết của kit QIAamp ADN Minikit.
Sau khi tách, ADN tổng số được rửa bằng cồn 70% và làm khô. Sau đó hòa tan với 100 µl nước deion. Muốn chắc chắn sản phẩm tách ADN tổng số của 05 mẫu vi khuẩn có đủ tiêu chuẩn sử dụng trong các thí nghiệm tiếp theo chúng tôi đã kiểm tra nồng độ và độ tinh sạch của ADN tổng số theo phương pháp phổ kế (phương pháp đo OD).
Kết quả kiểm tra 05 mẫu ngẫu nhiên trong đó có 03 mẫu thu được lượng ADN có nồng độ đủ lớn và độ tinh sạch cao (Hình 13).
Kết quả điện di trên hình cho thấy ADN tổng số của 03 chủng vi khuẩn
Staphylococcus aureus nghiên cứu đều rõ nét, không có vạch phụ kèm theo 03 chủng vi khuẩn S. aureus này đều đủ điều kiện để nhân dòng đoạn gen SEB bằng kĩ thuật PCR.
* Kết quả nhân gen SEB từ các chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus
Sau khi tách ADN tổng số của các chủng vi khuẩn Staphylococcus
aureus, chúng tôi sử dụng kỹ thuật PCR để nhân đoạn gen SEB với cặp mồi đặc hiệu là P-SEB-F và P-SEB-R.
Thành phần phản ứng PCR và chu kì nhiệt đã được trình bày ở mục 3.4.8. Khi có được sản phẩm PCR, chúng tôi tiến hành kiểm tra sản phẩm PCR bằng phương pháp điện di trên gel agarose 1%. Kết quả được thể hiện như trong hình.
Đối chứng âm, luôn thực hiện đồng thời khi tiến hành phản ứng là mẫu có chứa đầy đủ các thành phần của phản ứng PCR, chỉ khác là thay mẫu ADN bằng nước cất. Kết quả sau điện di không cho một băng nào. Điều này chứng tỏ trong quá trình thao tác không bị nhiễm ADN lạ. Mục đích chính của mẫu đối chứng âm là xem băng ADN thu được có phải là đoạn ADN quan tâm hay là ADN của vật lạ nhiễm vào do quá trình thao tác hoặc do dụng cụ thí nghiệm, hóa chất bị nhiễm bẩn.
Kết quả điện di trên hình 14 cho thấy tất cả sản phẩm PCR của 03 chủng vi khuẩn S. aureus đều đặc hiệu, rõ nét và không có vạch phụ kèm theo, có kích thước khoảng 534 bp đúng theo tính toán lý thuyết. Nhiều nghiên cứu đã thực hiện khi nhân đoạn gen SEB đều cho kết quả dương tính. Do vậy kết quả của chúng tôi cũng tượng tự với những công bố khác trong và ngoài nước và sản phẩm PCR của 03 chủng vi khuẩn S.aureus này được chúng tôi sử dụng cho các nghiên cứu tiếp theo.