đã phân lập được
Từ môi trường đã phân lập ở trên, chọn khuẩn lạc S.aureus nghi ngờ để kiểm tra hình thái, kích thước: có hình cầu, đường kính khoảng từ 0.8 – 1.5 µm, không di động, không sinh nha bào, bắt màu Gram (+).
Các thử nghiệm sinh hóa chính cần thực hiện cho S.aureus là: tính di động, phản ứng lên men đường manitol (+), glucose (+), galactose (-), sucrose (+), phản ứng sinh Indol 450
C (+), H2S; urease (-), MR (+), VP (-), Citrate (-), coagulase (+), catalase (+).
- Phản ứng Catalase: Lấy một phiến kính sạch, dùng que cấy cẩn thận lấy một phần của khuẩn lạc đặt lên giữa phiến kính. Nhỏ một giọt hydrogen peroxidaza (H2O2) lên vùng có khuẩn lạc. Phản ứng được cho là dương tính nếu ngay sau khi nhỏ chất phản ứng, bọt khí được hình thành. Ngược lại không có bọt khí hình thành, kết quả âm tính.
- Thử nghiệm Coagulase (đông tụ huyết tương): Bằng phản ứng đông tụ huyết tương thỏ
Đây là phản ứng phân biệt tụ cầu gây bệnh và không gây bệnh bằng cách cho vào ống nghiệm 0,5ml huyết tương thỏ và 0,5ml dịch cấy vi khuẩn. Ủ ấm 370
C/4 - 24h.
Phản ứng dương tính khi xuất hiện khối đông tụ. Nếu sau 24h không thấy xuất hiện khối đông tụ là phản ứng âm tính.
- Kiểm tra khả năng sinh Indol của vi khuẩn: Lấy khuẩn lạc từ đĩa thạch đã cấy thuần vào môi trường Nutrient Broth, bồi dưỡng trong tủ ấm ở 370
C trong 18 - 24h, vi khuẩn sẽ sinh trưởng, phát triển và sản sinh Indole (nếu có). Tiến hành kiểm tra bằng cách nhỏ giọt 2 - 3 giọt dung dịch Kovac’
s vào ống nghiệm.
+ Phản ứng dương tính: Trên bề mặt môi trường xuất hiện một vòng nhẫn màu đỏ tím hay màu hồng (đó là phản ứng kết hợp giữa Kovac’
s màu café và Indol không màu).
+ Phản ứng âm tính: Không có sự thay đổi màu.
- Lên men đường manitol: Cấy vi khuẩn đã nuôi cấy thuần khiết vào các ống canh thang peptone có đường, để tủ ấm 370C sau 24 h đọc kết quả.
+ Phản ứng âm tính: Môi trường không thay đổi màu. + Phản ứng dương tính: Môi trường chuyển màu đỏ.
- Thử nghiệm khả năng di động: Phát hiện khả năng di động của vi khuẩn nhờ có roi ở đầu.
Cách tiến hành: Cấy đâm sâu trong thạch mềm, khoảng 2/3 độ dài thạch. Ủ 370C từ 18 - 24h.
+ Phản ứng dương tính: Vi khuẩn có thể di động xung quanh đường cấy, xoắn ốc hoặc làm đục toàn bộ ống thạch.
- Thử nghiệm khả năng dung huyết: Một số vi khuẩn có khả năng phân giải hồng cầu có thể quan sát thấy trên thạch máu. Vùng tan máu được hình thành xung quanh khuẩn lạc. Có 3 dạng tan máu:
+ Tan máu (β): Vùng trong suốt xung quanh khuẩn lạc. + Tan máu (α): Vùng xám xanh xung quanh khuẩn lạc. + Tan máu (γ): Không có vùng tan máu.