- Tỷ lệ mẫu nhiễm, chết và tạo callus: Tổng số mẫu nhiễm
4.6.Thử nghiệm quy trình nuôi cấy mô cây Nghệ tạo callus
4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.6.Thử nghiệm quy trình nuôi cấy mô cây Nghệ tạo callus
Trên cơ sở các thắ nghiệm ở trên chúng tôi ựã tìm ra quy trình nuôi cấy mô cây Nghệ tối ưu nhất là: Sử dụng mô bánh tẻ ựể nuôi cấy với công thức khử trùng là dung dịch HgCl2 0,1% trong 10 phút kết hợp với dung dịch Johnson 10% trong 10 phút sau ựó nuôi cấy trên môi trường: MS ựầy ựủ bổ sung Saccharose 2 % , Agar 0,8 % , 2,4-D 3 mg/L, BAP 0,4 mg/l, NAA 2 mg/l, pH môi trường ~ 5,8. (Sơ ựồ hình 4.6)
để ựánh giá hiệu quả của quy trình chúng tôi tiến hành thắ nghiệm tạo callus với quy mô lớn hơn. Kết quả thu ựược không những phản ánh hiệu quả của quy trình mà còn chứng minh ựược quy trình có thể lặp lại trong thực tế góp phần công nghiệp hóa trong việc sản xuất Cucumin.
Nuôi cấy 500 mẫu Nghệ theo quy trình trên, sau một tháng tiến hành ựánh giá. Kết quả tổng hợp ở bảng 4.6
Bảng 4.6: Bước ựầu thử nghiệm nuôi cấy mô cây nghệ tạo callus
Loại mô Số mẫu
Số mẫu nhiễm (mẫu) Số mẫu hóa nâu (mẫu) Số mẫu sống (mẫu) Số mẫu hình thành callus (mẫu) Tỷ lệ hình thành callus (%) Bánh tẻ 500 36,0 30,0 434,0 416 83,2%
Sau 1 tháng nuôi cấy chúng tôi thấy số mẫu nhiễm là 36 mẫu, số mẫu chết là 30 mẫu, và số mẫu sống là 434 mẫu, trong ựó số mẫu hình thành callus là 416 mẫu ựạt tỷ lệ 82,3%. So sánh với các kết quả ở các thắ nghiệm 4.1, 4.2, 4.3 và 4.4 chúng tôi nhận thấy tỷ lệ hình thành callus ở ựây ựạt cao hơn rất nhiềụ điều này ựã khẳng ựịnh quy trình mà chúng tôi xây dựng ựạt hiệu quả cao (82,3%). Nếu hàm lượng Cucumin trong callus cao thì việc sản xuất Cucumin với quy mô công nghiệp sẽ ựem lại hiệu quả cao so với chiết tách từ Nghệ ngoài tự nhiên.
Sau khi hình thành callus (callus cấp 1) ựược 1 tháng, chúng tôi cắt nhỏ phần callus cấp 1 và tiến hành cấy chuyển callus, sau 1 tháng nuôi cấy thu ựược callus cấp 2. Tiếp tục cấy chuyển callus cấp 2 như trên, sau 1 tháng nuôi cấy chúng tôi thu
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 54
ựược callus cấp 3. Môi trường nuôi cấy callus cấp 2, callus cấp 3 giống như môi trường nuôi cấy cấp 1.
Các mẫu callus này ựược chúng tôi ựem ựi phân tắch hàm lượng Curcumin từ ựó so sánh với hàm lượng Curcumin trong củ nghệ ngoài tự nhiên.
Hình 4.6. Quy trình nuôi cấy mô cây Nghệ tạo callus