- Tỷ lệ mẫu nhiễm, chết và tạo callus: Tổng số mẫu nhiễm
4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.4. Nghiên cứu ảnh hưởng của NAA ựến sự phát sinh callus
Ở trên chúng tôi ựã xác ựịnh ựược hàm lượng BAP tốt nhất cho sự hình thành callus là 0,4 mg/lắt MS bổ sung 2 % , Agar 0,8 % , 2,4-D 3 mg/L. Tuy nhiên ựể tăng thêm tỷ lệ phát sinh callus chúng tôi tiếp tục nghiên cứu ảnh hưởng của NAA ựến sự phát sinh callus. NAA thuộc nhóm auxin là một auxin tổng hợp nhân tạo có hoạt tắnh mạnh thường ựược sử dụng trong nuôi cấy mô và tế bào kắch thắch sự phân bào và sinh trưởng của mô sẹo, cùng với kết quả nghiên cứu của một vài tác giả Nguyễn Hoàng Lộc, Woo, J. H. et al ựã kết luận bổ sung 2,0 mg/l NAA
là tốt nhất ựối với nuôi cấy củ Nghệ ựen, lá và bẹ cây Nghệ ựenẦ Chúng tôi
tiếp tục thắ nghiệm bổ sung thêm NAA vào môi trường nuôi cấy tốt nhất ở trên với nồng ựộ bổ sung NAA (0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0 mg/l). Thắ nghiệm ựược tiến hành với lát cắt Nghệ vàng bánh tẻ với 3 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc lại 40 mẫu (10 bình) trên môi trường nền là môi trường MS ựầy ựủ, Saccharose 2 % , Agar 0,8 % , 2,4-D 3 mg/L, BAP 0,4mg/l, pH môi trường ~ 5,8. Sau một tháng callus hình thành và phát triển, tiến hành ựánh giá, kết quả thắ nghiệm tổng hợp ở bảng 4.4.
Bảng 4.4. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của NAA ựến sự phát sinh callus Công thức Số lượng mẫu cấy/lần nhắc lại (mẫu) Nồng ựộ NAA (mg/l) Số mẫu hình thành callus (mẫu) Tỷ lệ phát sinh callus (%) CT1 40 0 25,0 62,5 CT2 40 1,5 26,3 65,8 CT3 40 2,0 27,3 68,0 CT4 40 2,5 26,7 66,7 CT5 40 3,0 26,0 65,0 CV% 2,0 LSD0,05 1,0
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 50
Qua bảng 4.4 và biểu ựồ 4.4 sau 1 tháng nuôi cấy chúng tôi thấy sau khi bổ sung thêm chất ựiều tiết sinh trưởng NAA vào môi trường nuôi cấy thì tỷ lệ callus cũng tăng lên. Ở công thức 1 khi chưa bổ xung thêm NAA thì callus không tăng và có tỷ lệ phát sinh callus thấp nhất 62,5%. Khi nồng ựộ NAA tăng từ công thức 2 (1,5-2mg/l) thì tỷ lệ mẫu phát sinh callus tăng 62,5 % ựến 68% nhưng khi tiếp tục tăng nồng ựội NAA từ (2,5-3mg/l) thì tỷ lệ mẫu phát sinh callus lại có xu hướng giảm và ở công thức 4 tỷ lệ phát sinh callus là 65%. Với hệ số sai khác LSD0,05 là 1,0 thì công thức 3 là thắch hợp nhất với tỷ lệ phát sinh callus là 68% với nồng ựộ NAA là 2mg/l.
Biểu ựồ 4.4: Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của NAA ựến sự phát sinh callus
Hình 4.4. Ảnh hưởng của NAA ựến khả năng hình thành callus sau 1 tháng nuôi cấỵ (từ trái qua phải CT1, CT2, CT3, CT4, CT5)
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 51
Nhận xét: Từ các thắ nghiệm 4.2, 4.3, 4.5 chúng tôi rút ra môi trường tối ưu nhất cho nuôi cấy mô cây Nghệ vàng tạo callus là môi trường MS ựầy ựủ, Saccharose 2 %, Agar 0,8 % , 2,4-D 3 mg/L, BAP 0,4 mg/l, NAA 2 mg/l, pH môi trường ~ 5,8. Môi trường này sẽ ựược kiểm ựịnh ở thắ nghiệm 4.6.