Hiện nay có nhiều công trình nuôi cấy in vitro theo hướng tái sinh cây con như: Tác giả M. Ạ Islam và cộng sự, 2004 [24]. Nuôi cấy in vitro thành công rễ con mọc lên từ chồi nách củ nghệ. Rễ con ựược cắt bỏ và nuôi cấy trên môi trường có hormone thực vật trong 4 tuần ựể cảm ứng mầm. Ảnh hưởng của sucrose, ánh sáng và chất ựiều tiết sinh trưởng trong nuôi cấy in vitro sản xuất mầm nghệ ựược nghiên cứu là thắch hợp nhất cho sản xuất mầm Nghệ là: sucrose 9%, nồng ựộ BA (12ộM) và NAA (0,3ộM) phù hợp với cảm ứng rễ con nuôi cấy trong bóng tốị Rễ con lớn và phát triển tốt dưới ựiều kiện in vivo và phát triển chồi dễ dàng, khi ựược chuyển trực tiếp từ ống nghiệm sang ựất.
Wirat vanichsriratana và cộng sự ựã nuôi cấy in vitro chồi rễ cây Nghệ vàng. Chồi rễ ựược rửa sạch bằng nước sau ựó ngâm ba lần với 100 ml carbendazim 0,5% và ba giọt Twen-20 trong 30 phút và rửa sạch bằng nước vô trùng. Chồi rễ ựược nuôi trong môi trường MS bổ sung 5 mg/l BAP bổ sung sucrose 30 g/l.[50]
Theo tác giả Elsa Ventura Zapata và cộng sự, 2003 [12] nuôi cấy in vitro chồi nghệ trong môi trường MS ựể tạo ra những cây con. đầu tiên tái biệt hóa ựể hình thành callus nuôi cấy trong môi trường MS bổ sung 1,5mg/l 2,4-Dichlorophenoxyacetic, 0,2mg/l Benzyl aminopurine, ựể hình thành các cây mới sau ựó ựưa vào hệ thống thủy canh, Hệ thống thủy canh bao gồm một cái cốc nhỏ ựường kắnh 8cm cao 5cm chứa 200ml dung dịch dinh dưỡng của Hoagland và Arnon ựược bảo vệ bởi 1 tầm nhôm có lỗ mở ựường kắnh 5mm, ựảm bảo rễ luôn tiếp xúc với dung dịch dinh dưỡng. mỗi cốc ựược bao phủ bởi 1 túi polyetylen trong suốt (30,5x19cm) không thấm nước qua ựó ánh sáng có thể vượt qua trong khi có thể chống lại sự tấn công của côn trùng. Sau ựó túi dần mở ra ,ựịnh kì ựục lỗ,( mỗi tuần) lỗ nhỏ ( ựường kắnh 5mm) trong túị
Số lượng lá và rễ tăng gấp ựôi số lượng ban ựầu của các cây sau 8 tuần. Ngoài ra tỉ lệ % sống của cây băng phương pháp thủy canh là 90% trong khi các hệ thống khác cây bị giảm nhiềụ hơn nữa phương pháp thủy canh có thể giảm tổn thất do bệnh tật hoặc côn trùng.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 33
Hình 2.3. Hệ thống nuôi cấy thủy canh
Gần ựây theo tác giả Nguyễn Hoàng Lộc và cộng sự,2009 [28] ựã nuôi cấy thành công dịch huyền phù tế bào cây nghệ ựen và xác ựịnh hàm lượng Curcumin trong nuôi cấy invitrọ
Nuôi cấy tế bào huyền phù ựược thiết lập bằng cách chuyển 3g callus 2 tuần tuổi vào bình tam giác 250ml chứa 50ml môi trường MS lỏng có 3% sucrose, bổ xung 3mg/l 2,4-D và 0,5mg/l BAP. Nuôi lắc ở tốc ựộ 150 vòng/phút (v/p) trong 12 ngàỵ Sau ựó chuyển 3g sinh khối sang môi trường có thành phần tương tự và nuôi trong cùng một ựiều kiện ựến khi thu ựược một dịch huyền phù tế bào ựông nhất. 100g sinh khối tế bào từ nuôi cấy lắc ựược ựưa vào hệ lên men 10 L, tốc ựộ khuấy 150 (v/p) tốc ựộ sục khắ 2,5 l/phút sinh khối tế bào ựược thu ngày/ lần trong suốt 18 ngày ựể khảo sát khả năng sinh trưởng của chúng. Môi trương nuôi cấy ựược ựiều chỉnh pH 5,8, các thắ nghiệm nuôi cấy in vitro ựược duy trì ở nhiệt ựộ 250C ựiều kiện chiếu sáng 500 lux.
Sinh khối tươi của tế bào ựược sấy khô ở 400C ựến khối lượng không ựổi, sau ó nghiền thành bột mịn ựể phân tắch Curcumin.
Kết quả ựạt ựược: Tế bào Nghệ ựen sinh trưởng trong hệ lên men 10 L ựạt cực ựại sau 14 ngày ( 603g tươi, tương ựương 53,25 g khô) gấp 3 lần lúc bắt ựầu nuôi cấỵ Hàm lượng Curcumin cũng ựược tắch lũy cao nhất ở thời ựiểm này ựạt 1,16% khối lượng khô cao gấp 2,7 lần Curcumin ở củ Nghệ ựen 1 năm tuổi (0,43%).
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 34