III. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.3.2. Phương pháp đánh giá một số đặc điểm nông sinh học quan trọng
Các đặc điểm nông sinh học được khảo sát theo IRRI standard evaluation system for rice, 2002.
3.3.2.1. Xác định thời gian qua các giai đoạn sinh trưởng
- Từ gieo mạ đến bắt đầu trỗ: lúc có 10% số cây chính có bông thoát khỏi bẹ lá đòng khoảng 5 cm.
- Từ trỗ đến khi chín: khi 85% số hạt chắc có màu vàng.
Sau đó tính tổng thời gian sinh trưởng từ ngày gieo mạ đến ngày lúa chín hoàn toàn.
3.3.2.2. Đặc điểm nông sinh học chính thời kỳ ruộng cấy
- Số nhánh hữu hiệu: 05 cây (số nhánh có khả năng tạo thành bông). - Chiều cao cây cuối cùng: Đo từ sát mặt đất đến mút đầu bông không kể râu hạt của 10 cây. Theo “Hệ thống tiêu chuẩn đánh giá cây lúa của IRRI, 1996” [28], chiều cao cây lúa được chia thành 3 mức ứng với thang điểm:
1 - Bán lùn (<90cm)
5 - Trung bình (90-125cm) 9 - Cao (> 125cm).
- Chiều dài bông: Đo từ đốt cổ bông đến mút đầu bông không kể râu. - Độ thoát cổ bông: Quan sát khả năng trỗ thoát của quần thể vào giai đoạn chín sữa đến vào chắc (theo “Hệ thống tiêu chuẩn đánh giá cây lúa của IRRI, 1996”):
Trường Đại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp……….. 34
+ Điểm 1: Thoát tốt
+ Điểm 3: Thoát trung bình + Điểm 5: Vừa đúng cổ bông + Điểm 7: Thoát một phần + Điểm 9: Không thoát được
- Độ cứng cây: Quan sát quần thể của cây trước khi thu hoạch (theo “Hệ thống tiêu chuẩn đánh giá cây lúa của IRRI, 1996”):
+ Điểm 1: Cứng - cây không đổ
+ Điểm 3: Cứng vừa - hầu hết cây nghiêng vừa + Điểm 5: Trung bình - hầu hết cây bị nghiêng + Điểm 7: Yếu - hầu hết các cây bị đổ rạp + Điểm 9: Rất yếu - các cây bị đổ rạp
3.3.2.3. Năng suất và các yếu tố cấu thành
- Số bông hữu hiệu/khóm (A): đếm 5 cây (lấy số trung bình); - Số hạt chắc/bông (B);
- Khối lượng 1000 hạt (gam) (C);
- Năng suất tiềm năng = A×B×C×10-4 × số khóm/ m2( tạ/ ha) [17] Với mỗi giai đoạn quan sát, tiến hành lập bảng.
3.3.2.4. Đánh giá khả năng kháng bệnh bạc lá bằng lây nhiễm nhân tạo
a, Môi trường nuôi cấy vi khuẩn
-Vi khuẩn Xanthomonas oryzae p.v oryzae được nuôi cấy trên môi trường Wakimoto (Wakimoto, 1995).
Thành phần môi trường gồm: Khoai tây 300gam; đường saccarose 15g; pepton 5g; agar 17g; Na2HPO4.12H2O 2g; Ca2(NO3).4H2O 0,5g; nước cất 100ml; pH 6,8-7,0.
- Môi trường Wakimoto được hấp khử trùng ở nhiệt độ 1210c trong ống nghiệm thời gian 20 phút, tạo mặt thạch nghiêng.
Trường Đại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp……….. 35
Trước khi lây nhiễm nguồn vi khuẩn được cấy bảo quan trong môi trường Skim milk ở -300c, được cấy chuyển sang môi trường Wakimoto ở 280c sau 48 - 72 giờ tuổi, sau đó pha loãng dung dịch vi khuẩn bằng nước cất vô trùng đạt được nồng độ 108 CFU để lây bệnh.
b, Phương pháp lây nhiễm
Lây bệnh theo phương pháp sát thương cơ giới cắt đầu lá của Gs. S.Taura, 2002; Dùng kéo đã khử trùng nhúng vào dung dịch chứa vi khuẩn gây bệnh bạc lá (mỗi chủng vi khuẩn dùng một kéo vô trùng) cắt lên đầu lá lúa một đoạn dài khoảng 2-5cm và lây nhiễm vào giai đoạn lúa làm đòng - trỗ, mỗi chủng một cây, trên một cây cắt toàn bộ lá xanh trên đó.
Trước khi lây nhiễm, tiến hành làm thí nghiệm để xác định khả năng duy trì độ độc tính của các chủng trong quá trình bảo quản bằng cách lây thử lên dòng mẫn cảm IR24. Sau 5 ngày thấy đầu lá héo xanh và tái đi chứng tỏ các chủng vi khuẩn này có độc tính và có thể dùng để lây nhiễm được.
c, Đánh giá khả năng kháng bệnh bạc lá
Sau khi lây nhiễm 18 ngày đối với vụ mùa và 20 ngày đối với vụ xuân tiến hành đo chiều dài vết bệnh theo phương pháp do Gs. S.Taura, 2002 đề xuất.
Dựa vào chiều dài vết bệnh để đánh giá tính kháng của giống như sau: + Chiều dài vết bệnh < 8cm: Kháng bệnh bạc lá (R)
+ Chiều dài vết bệnh từ 8-12cm: Nhiễm vừa (M) + Chiều dài vết bệnh > 12cm: Nhiễm nặng (S)