2.3.2.1. Định lượng các thông số lipid
- Các xét nghiệm được đo trên máy ARCHITECT i1000 SR của hãng Abbort -USA, sử dụng kit hóa chất của hãng Beckman Coulter - USA.
- Định lượng lipid máu gồm: cholesterol toàn phần, triglycerid, HDL-C, LDL-C. Tiến hành các xét nghiệm vào các thời điểm:
Lần 2: Sau 3 tháng điều trị
- Bệnh nhân được lấy máu buổi sáng sau khi ngủ dậy, nhịn đói ít nhất 12 giờ trước khi lấy máu.
+ Lấy máu tĩnh mạch.
+ Thắt garo không quá 1 phút.
+ Bảo quản mẫu nghiệm máu ở nhiệt độ 0-40 C. + Ly tâm tách huyết tương để định lượng.
* Phương pháp định lượng cho cholesterol toàn phần máu
- Phương pháp định lượng: phương pháp so màu dùng enzyme. - Định lượng HDL – Cholesterol máu theo Phương pháp End Poin. - Nguyên tắc:
- Cường độ màu tỉ lệ với nồng độ Cholesterol
- Giá trị bình thường: Tiêu chuẩn quốc tế cho Cholesterol người lớn khuyến cáo:6
< 5.2 mmol/L (200 mg/dL) Lý tưởng 5.2 – 6.2 mmol/L (200 – 239 mg/dL) Hơi cao ≥ 6.2 mmol/L (240 mg/dL) Cao
* Phương pháp định lượng triglycerid máu [46]
- Phương pháp định lượng: phương pháp so màu dùng enzyme. - Định lượng HDL – Cholesterol máu theo Phương pháp End Poin. - Nguyên tắc:
Thủy phân triglycerid bằng enzym, xác định glycerol được giải phóng bằng phương pháp so màu
Glycerol+ATP Glycerol kinase G3P+ADP G3P + O2 GPO DAP +H2O2
H2O2 +4-AP + P-chlorophenol POD Quinone +3H2O - Cường độ màu tỷ lệ với nồng độ triglycerid trong máu. - Giá trị bình thường Bình thường:
< 1.70 mmol/L (150 mg/dL)
Mức cảnh báo 1.70 – 2.25 mmol/L (150 – 199 mg/dL) Cao 2.26 – 5.64 mmol/L (200 – 499 mg/dL)
Rất cao ≥ 5.65 mmol/L (500 mg/dL)
* Phương pháp định lượng HDL – Cholesterol máu [46]
- Phương pháp định lượng: phương pháp so màu dùng enzyme. - Định lượng HDL – Cholesterol máu theo Phương pháp End Poin. - Nguyên tắc:
Khi cho kháng thể trong trong hóa chất R1 vào sẽ kết hợp những thành phần ngoài HDL(LDL,VLDL,Chylomicrons).Phức hợp KN-KT tạo thành sẽ không phản ứng khi cho enzym trong R2 vào.HDL-C được định lượng nhờ enzym chromogen.(định lượng HDL-C trực tiếp)
LDL,VLDL,Chylomicrons Antihuman--lipoprotein antibody Antigen-Anlibody complexes
HDL-cholesterol + H2O + O2 CHE and CHO Cholest-4-en-3one + Fattyacids + H2O2
H2O2 + 4-AA + F-DAOS POD Blue dye+ + F + 2H2O - Giá trị bình thường: Tiêu chuẩn Cholesterol (NCEP)
< 1.03 mmol/L (< 40 mg/dL) HDL-cholesterol thấp (nguy cơ cao gây bệnh mạch vành)
≥ 1.55 mmol/L (≥ 60 mg/dL) HDL-cholesterol cao (“âm tính” với nguy cơ cao trong bệnh mạch vành)
* Phương pháp định lượng LDL-Cholesterol máu[46]
- Định lượng HDL – Cholesterol máu theo Phương pháp End Point. - Nguyên tắc:
Đại diện trong hóa chất R1 bảo vệ LDL từ phản ứng enzym. Những thành phần không phải LDL (HDL, VLPL, CM) bị phân hủy bởi cholesterol esterase (CHE) và cholesterol oxidase (CHO). Hy drogen peroxida(POD) được sản xuất bởi phản ứng bị phân hủy bởi Catalase trong R1.Khi thêm R2 vào hóa chất bảo vệ tỏa ra từ LDL và Catalase không hoạt động bởi Sodium acid.LDL được đinh lượng bởi CHO/PAP
2LDL-cholesterol + 2H2O + 2O2 CHE and CHO 2 Cholest-4-en-3- one + 2Fattyacids + 2 H202 Deprotecting Regent
2 H202 + 4-AA + HDAOS POD BluDye+ + OH- + 3 H2O LDL được tính theo công thức của Friedewald với điều kiện Triglycerid < 4,6 mmol/l
LDL-C = TC – (HDL- C + ) mmol/l - Giá trị bình thường:
< 2.6 mmol/L (100 mg/dL) Tốt
2.6 – 3.3 mmol/L (100 – 129 mg/dL) Bình thường 3.4 – 4.1 mmol/L (130 – 159 mg/dL) Hơi cao 4.1 – 4.9 mmol/L (160 – 189 mg/dL) Cao ≥ 4.9 mmol/L (190 mg/dL) Rất cao
2.3.2.2. Định lượng glucose
Chẩn đoán ĐTĐ: ĐTĐ được chẩn đoán khi thỏa 1 trong 3 điều kiện sau: + Glucose huyết tương lúc đói (ít nhất sau 8 giờ không ăn) >= 126mg/dl (7mmol/l) hoặc:
+ Glucose huyết tương bất kỳ >= 200mg/dl (11,1mmol) kèm triệu chứng lâm sàng cổ điển: tiểu nhiều, uống nhiều, sút cân hoặc:
+ Glucose huyết tương 2 giờ sau nghiệm pháp dung nạp glucose (uống nhanh trong 5 phút 75 glucose hòa trong 200ml nước) >= 200mg/dl
(11,1mmol/l).
Chẩn đoán chỉ được xác định với xét nghiệm lần thứ hai (ngày sau) có kết quả thỏa mãn 1 trong 3 tiêu chuẩn trên (không bắt buột phải đúng với xét nghiệm lần đầu).
* Phương pháp lấy mẫu
Mẫu máu xét nghiệm được lấy 2ml qua đường tĩnh mạch với Garrot không quá 2 phút. Mẫu xét nghiệm được lấy khi đói (lúc bệnh nhân chưa ăn sáng)
* Phương pháp định lượng
Nguyên tắc: Định lượng glucose máu đặc hiệu là phương pháp enzym- màu. Đó là phương pháp định lượng glucose máu dựa trên phản ứng xúc tác của gluco-oxidase: oxy hóa glucose thành acid gluconic và peroxidhydrogen (H2O2). H2O2 tác dụng với 4-aminoantipyrine và phenol dưới xúc tác của peroxidase (POD) tạo thành chất có màu hồng là quinoneimine và nước. Đo mật độ quang của đỏ quinoneimine ở bước sóng 500nm sẽ tính được kết quả glucose máu
Thực hiện trên máy sinh hóa tự động loại AU 400 do Nhật sản xuất, được cung cấp bởi hãng Olympus đã được chuẩn hóa và kiểm tra định kỳ.
Kết quả chẩn đoán tăng glucose máu theo ADA 2014
2.3.2.3. Định lượng Creatin Phospho Kinase (CPK)[46].
- Xét nghiệm được đo trên máy phân tích tự động OLYMPUS AU400 của Nhật Bản, sử dụng kit hóa chất của hãng Beckman Coulter - USA.
- Định lượng CPK theo phương pháp Kinetic.
- Nguyên tắc: Phương pháp dựa trên các khuyến cáo của "Liên đoàn Quốc tế Hóa học lâm sàng" (IFCC).
CK xúc tác chuyển một nhóm phosphate từ creatine phosphate đến adenosine diphosphate (ADP) để tạo thành triphosphate creatine và adenosine (ATP). ATP hình thành được sử dụng để tạo thành glucose-6-phosphate và ADP từ glucose. Phản ứng này được xúc tác bởi hexokinase (HK) cần ion magiê để tối ưu hóa. Glucose-6-phosphate bị oxy hóa dưới tác động của enzyme glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6P-DH) với gây giảm coenzyme nicotinamide adenine dinucleotide (NADP), để tạo thành NADPH và 6 phosphogluconate. Tỷ lệ tăng hấp thụ ở bước sóng 340/660nm do sự hình thành NADPH tỷ lệ thuận với nồng độ CK trong mẫu.
- Giá trị bình thường
Nam ≤ 171 U/L (2.85 µkat/L) Nữ ≤ 145 U/L (2.42 µkat/L)
2.3.2.4. Định lượng SGOT, SGPT [46]
- Xét nghiệm được đo trên máy phân tích tự động OLYMPUS AU400 của Nhật Bản, sử dụng kit hóa chất của hãng Beckman Coulter - USA.
- Định lượng GOT-GPT theo phương pháp Kinetic.
- Mẫu máu được lấy cùng lúc các xét nghiệm sinh hóa khác, tránh vỡ hồng cầu, tách lấy phần huyết thanh.
- Nguyên tắc: Xác định hoạt độ enzym trong huyết thanh nhờ vào phản ứng sau
+ SGOT:
L- Aspartat + 2-Oxoglutarate AST Oxalacetate + L-Glutamate Oxalacetate + NADH + H+ MDH L – Malate + NAD+
+ SGPT:
L- Alanine + 2-Oxoglutarate ALT Pyruvate + L- Glutamat Pyruvat + NADH + H+ LDH L-lactat + NAD+
- Giá trị bình thường
SGOT: Nam (Trưởng thành) < 50 U/L (0.85 µkat/L) Nữ (Trưởng thành) < 35 U/L (0.60 µkat/L) SGPT: Nam (Người lớn) < 50 U/L (0.85 µkat/L)
Nữ (Người lớn) < 35 U/L (0.60 µkat/L)
2.3.2.5. Xét nghiệm công thức máu
Được lấy mẫu xét nghiệm và phân tích tại khoa huyết học Bệnh viện tỉnh Trà Vinh, với máy Máy huyết đồ CELL-DYN 3200 – Abott USA
Hình 2.2. Máy huyết đồ CELL-DYN 3200 – Abbott USA
2.3.2.6. Thận nhân tạo chu kỳ
- Máy TNT: Máy Dialog của hãng B.Braun, Đức.
- Màng lọc: Low- Polysulfone (F7LPS) của hãng Fresenius. - Dịch lọc: Dung dịch Bicarbonat.
- Nước sử dụng: Nước máy thành phố đã qua xử lý hệ thống RO.
- Đường mạch máu chạy thận: Dò động tĩnh mạch ở cẳng tay (AV Fistula).
Hình 2.2. Bệnh nhân STM đang LMCK tại bệnh viện đa khoa Trà vinh.
2.3.2.7. Thuốc điều trị rối loạn lipid máu trong giai đoạn nghiên cứu
Chúng tôi sử dụng thuốc giảm lipid máu là Atorvastatin (Statinagi 20 của Công ty Cổ phần Dược phẩm Agimexpharm), viên 20mg, liều 1 viên/ngày, uống 1 lần sau bữa ăn tối.
Tên thuốc: Statinagi 20
Tên hoạt chất: Atorvastatin calcium Đóng gói: Hộp 2 vỉ x 10 viên
Nhóm Dược lý: Thuốc tim mạch Thành phần: Atorvastatin calcium Hàm lượng: 20mg Atorvastatin Dạng bào chế: Viên bao phim Tiêu chuẩn: TCCS
Quy cách đóng gói: hộp 3 vỉ x 10 viên nén dài bao phim Số đăng ký: VD-9314-09
Hạn dùng: 36 tháng
Nhà sản xuất: Công ty cổ phần dược phẩm Agimexpharm Nước sản xuất: Việt Nam
Hình 2.4. Tên thuốc Statinagi 20
- Thời gian điều trị 3 tháng.
- Sau 3 tháng cho xét nghiệm lại bilan lipid máu, glucoes máu, urê máu, creatinine máu, SGOT máu, SGPT máu, acid uric máu.