C, 5% COR 2 R Sau 24 gi ờ hút bỏ dịch môi trường cũ và cho vào mỗi giếng 1ml EGM-2.
CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN
3.5.2. Kiểm tra kết quả chuyển gen gfp trước chọn lọc puromycin
Lấy kết quả chuyến gen bằng vector Lentivirus bổ sung polybrene tiếp tục phân tích khả năng chuyển gen gfpnày bằng kỹ thuật flow cytometry. Kết quả phân tích được thể hiện trên hình 3.15
Hình 3.15. Kiểm tra kết quả chuyển gen gfp trước chọn lọc puromycin bằng kỹ thuật flow cytometry.
(a)Kết quả phân tích biểu diễn dưới dạng Dot blot. (b) Kết quả phân tích biểu diễn dạng biểu đồ.
Mỗi điểm trên đồ thị dạng Dot blot (a)thể hiện sự di chuyển của một tế bào khi nó đi qua đầu dò. Trục X và Y đo các mức độ phát sáng khác nhau, một điểm biểu thị tương ứng với một tế bào có dạng phát sáng khác nhau. Kết quả từ khung dữ liệu tổng quát khi phân tích dòng chảy cho thấy các tế bào phân hóa trên một vùng tương đối rộng và có thể chia thành hai tiểu vùng khác nhau. Kết quả ở dạng biểu đồ (b) EPC-GFP cho thấy có sự phân vùng tế bào rõ ràng là vùng tế bào phát quang mạnh và vùng tế bào không phát quang. Chuyển gen gfp vào EPC có thể xảy ra hai khả năng sau: gen gfp vào nhân nhưng không gắn vào bộ gen của tế bào và gen gfpvào nhân đồng thời gắn vào bộ gen của EPC. Gen
gfp không gắn vào bộ gen EPC nhưng trong thời điểm nhất thời có thể copGFP có khả năng hoạt động với cường độ thấp nên phát quang yếu, cường độ lệch nhau nên máy ghi nhận ở dạng Dot blot bằng các dấu chấm và các dấu chấm tương đối rời rạc. Nếu phân tích ở dạng biểu đồ thì kết quả phát quang yếu và tạm thời không được ghi nhận, kết quả âm tính với tín hiệu huỳnh quang. Đối với khả năng chuyển gfpgắn vào nhân EPC, gen gfptạo ra các protein GFP phát quang mạnh biểu hiện ở dạng Dot blot và biểu hiện vùng dương tính trên dạng biểu đồ. Như vậy khi chưa chọn lọc tế bào với puromycin thì trong tổng số các tế bào mang gen
gfpvẫn còn khả năng EPC mang gen gfpchưa gắn vào bộ gen của EPC.