3.1. Tinh chê sản phẩm qua sắc ký cột.
3.1.1. Chuẩn bị:
Cột sắc ký là ông thủy tinh dài 50 cm, đường kính 1.7cm. Đầu dưới có khóa bằng thủy tinh.
Chất hâ"p phụ : silicagel Merck 60F254 (0.063 - 0.2mm.) Hệ dung môi giải ly : Ethanol 50°.
3.1.2 Cách làm:
Cột sắc ký thật khô được lắp cô định trên giá thật vững chắc, lót ở dưới đáy cột một lớp bông, cho từ từ silicagel vào cột đến khi cột đạt được chiều cao nhâ"t định. Tiếp tục rót dung môi từ từ vào cột và cho chảy liên tục một thời gian để ổn định cột. Khi cột đã ổn định, mở khoá cho dung môi chảy đến khi mặt cột vừa khô thì khoá lại.
Phân tích HPLC và MS các mẫu sản phẩm tại Viện Công Nghệ Hóa Học tp.HCM. Điều kiện : cột ZORBAX SB - Ci8, 5pm, 4.6x150mm, tốc độ dòng 0.4ml/phút, pha động là H20/Me0H - acetone nitrin 1% (50:50).
3.2.2. XÚC định lại độ chuyển hóa của glucose trong phản ứng - dự đoán
phân tử
lượng trung bình của Lauryl polyglucoside :
Trong 27.43g sản phẩm M], lấy 0.5g tinh chế qua sắc ký cột ta thu được hai phân đoạn gộp :
Phân đoạn gộp I có khôi lượng m, = 0.032g
Theo phương trình phản ứng. 180n (163n +185).
Ĩ4.625g 21.944g.
n = 1.69 .
* Nấu ta cho sản phẩm của phân đoạn gộp I là diglucoside thì :
Lượng glucoside (qui đổi từ diglucoside) trong 27.43g sản phẩm là :0.032 X27.43/0.5 X (2 X 180/342) = 1.847g.
Độ chuyển hoá của glucose :91.005% - (1.847 X 100)/18 = 80.743%. Lượng glucose tham gia phản ứng: 14.533g.
Lượng sản phẩm thu được sau tinh chế: 0.400 X 27.43/0.5 = 21.944g. Theo phương trình phản ứng.
LUẬN VĂN THẠC sĩ Trang 88
Phân tử lượng trung bình của lauryl polyglucoside : 459.78g Mức độ glucoside của sản phẩm n = 1.69 .
Tương tự cho mẫu M2 ( lấy 0.5g trong 29.427g sản phẩm thu được sau phản ứng để tinh chế qua sắc ký cột, khôi lượng phân đoạn gộp I2 là 0.047g và khôi lượng phân đoạn gộp II2 là 0.416g). Kết quả tính được độ chuyển hoá của glucose là 83,2%