Những phương pháp đã đề cập ở trên ch dừng lại ở mức độ sàng lọc để phân loại bệnh mà chưa có giá trị trong tư vấn di truyền. Để làm được điều này cần phải có hiểu biết cặn kẽ ở mức độ phân tử của bệnh. Xét nghiệm sinh học phân tử sẽ cho biết chính xác kiểu gen của mỗi bệnh nhân và người mang thalassemia thể ẩn. Bên cạnh đó, kết quả xét nghiệm sinh học phân tử sẽ làm sáng tỏ mối quan hệ giữa kiểu gen và biểu hiện lâm sàng bệnh. Đây là những cơ sở quan trọng cho việc tư vấn người mang thalassemia thể ẩn, giúp họ có chọn lựa để có những đứa con khỏe mạnh, đồng thời hạn chế sự phổ biến của gen bệnh trong cộng đồng.
Tần suất những đột biến mất đoạn gen α-globin đặc trưng cho từng vùng lãnh thổ và từng tộc người. Trong quá trình xét nghiệm đột biến trên gen α-globin, những mất đoạn lớn phổ biến được xác định trước tiên bằng phương PCR khoảng cách hay gap PCR. Kỹ thuật này đã được áp dụng để phát hiện 2 mất đoạn phổ biến trong α+
-thalassemia là –α3.7, –α4.2 và 5 mất đoạn phổ biến trong αo-thalassemia gồm: –α20,5
, --SEA, --MedI, --T HAI, --FIL [6, 42, 58].
Nếu kết quả xét nghiệm gen âm tính với các mất đoạn phổ biến nhưng lại không phù hợp với các đặc điểm lâm sàng bệnh thì cần phải sàng lọc tiếp với các mất đoạn lớn ít phổ biến bằng kỹ thuật MLPA. MLPA (Multiplex Ligation- dependent Probe Amplification) là kỹ thuật mới dựa trên việc khuếch đại đồng thời nhiều đầu dò thay vì khuếch đại trực tiếp từ khuôn ADN. Quy trình kỹ thuật bao gồm các bước cơ bản như sau: (1) thiết kế nhiều cặp oligo đầu dò bắt cặp với vùng ADN quan tâm và một mồi để khuếch đại mỗi cặp đầu dò; (3) tiến hành lai đầu dò với vùng ADN quan tâm; (4) tiếp theo nối 2 đầu dò trong cùng 1 cặp lại với nhau; (5) khuếch đại các đầu dò sau nối với 1 cặp mồi; (6) điện di sản phẩm trên máy điện di mao quản; (7) phân tích sự sai khác trên mỗi đoạn sản phẩm [26, 55, 69].
19
Việt Nam, hiện tại ch có bệnh viện Từ Dũ (HCM) sử dụng phương pháp MLPA trong xét nghiệm gen phát hiện đồng thời 6 mất đoạn lớn: --SEA
, --T HAI, --FIL, --MED, - α3.7