KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.1.2 Xác ñị nh phương pháp khử trùng ñố iv ới quả lan
Trong tự nhiên các loài lan nhân giống nhờ sinh sản hữu tắnh qua hạt, do hạt lan không có nội nhũ nên khả năng nẩy mầm rất thấp.
Nhiều tác giả trên thế giới ựã sử dụng phương pháp gieo hạt in vitro và ựạt tỷ lệ nẩy mầm rất caọ
Theo Noel Bernard (1909) nhà thực vật người Pháp ựã phân lập nấm ở rễ cây lan con và cấy vào hạt lan trong nuôi cấy mô, bằng cách này 100% hạt lan nảy mầm.
Các tác giả người đài Loan là Shu Fung Lo và cộng sự, năm 2004 ựã công bố khi nghiên cứu thành công trên cây lan thuốc Dendrobium tosaense môi trường gieo hạt trên nền MS+3% saccharose, không có chất ựiều tiết sinh trưởng. Tiếp thu những kết quả trên, chúng tôi ựã nghiên cứu cách khử trùng quả lan ựể làm nguồn vật liệu trong nhân giống in vitro với 02 loài lan D.nobile, D.chrysanthum. Các kết quả ựược thể hiện tại bảng 3.3, hình 3.2 và hình 3.3.
Bảng 3.3. Ảnh hưởng phương pháp khử trùng ựến tỷ lệ mẫu sống và nẩy mầm của hạt lan thuộc 02 loài lan rừng D.nobile và
D.chrysanthum (Sau 6 tuần, đơn vị tắnh:%) Tỷ lệ mẫu sống và phát sinh protocorm Tỷ lệ mẫu sống và phát sinh chồi Chỉ tiêu
Công thức D.nobile D.chrysanthum D.nobile D.chrysanthum
Nhúng quả trong cồn 960, ựốt trên ngọc lửa ựèn cồn
97 0 3 100
Nhúng quả bằng cồn 960, ngâm trong H2O2 2% trong 5 phút. 96 0 4 100 Nhúng quả bằng cồn 960, ngâm trong HgCl20,1% trong 5 phút. 97 0 3 100
Hình 3.2. Minh họa gieo hạt lan rừng D.nobile (Sau 6 tuần nuôi cấy)
Từ kết quả thu ựược cho phép nhận xét:
Sau 6 tuần gieo hạt của 02 loài lan rừng tại cả 03 công thức thắ nghiệm ựều cho tỷ lệ nẩy mầm cao ựạt 100%. Tuy nhiên, chúng tôi lựa chọn công thức 1 ựể khử trùng mẫu quả của 02 loài lan rừng này, bởi với công thức 1 (Nhúng quả trong cồn 960, ựốt trên ngọn lửa ựèn cồn) dễ thực hiện, ắt tốn kém, ắt ựộc hạị
Sau khi gieo hạt, loài lan D.nobile có 97% hạt phát sinh thể sinh chồi (protocorm), 3% nẩy cụm chồi trên môi trường cơ bản (Nền MS+100ml nước dừa+10g saccaroza+ 6g agar)/lắt.
Trên cùng nền môi trường nuôi cấy cơ bản (Nền MS+100ml nước dừa+10g saccaroza+6g agar)/lắt với loài lan D.chrysanthum 100% hạt nẩy mầm tạo chồi, cụm chồi hoàn toàn không hình thành thể sinh chồi (protocorm). Các kết quả thực nghiệm của chúng tôi cũng phù hợp với kết quả của một số tác giả như: Pierik, (1997) [86] ựã công bố việc khử trùng quả lan rất ựơn giản chỉ cần nhúng ựốt trong cồn 96%, gieo trên môi trường nuôi cấy ựặc. Shu Fung Lo, et al (2004) ựã chỉ rõ môi trường gieo hạt trên nền MS+3% saccharose, không có chất ựiều tiết sinh trưởng ựối với cây lan thuốc
Dendrobium tosaense. Năm 2007, các tác giả Kong, Q., Yuan, S.Ỵ, Végvári,
Gy ựã nghiên cứu, ựề xuất môi trường gieo hạt trên giống lan Dendrobium strongylanthum Rchb.f. là ơ MS bổ sung 0,2 mg/lắt NAA
Khi ựã tạo ựược nguồn mẫu trong nuôi cấy in vitro, chúng tôi tiếp tục
bố trắ các thắ nghiệm của mục 3.2.
3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng của các yếu tố ựến khả năng nhân nhanh, tạo cây hoàn chỉnh in vitro ựối với hai loài lan D.nobile và