1 D.longicornu
1.3.6 Nhân giống in vitro Dendrobium nobile và Dendrobium chrysanthum
Giá trị cao về thẩm mỹ và ñặc biệt là giá trị dược liệu của D.nobile và
D.chrysantum ñã thu hút sự quan tâm nghiên cứu của các tác giả trên thế giới về nuôi cấy in vitro hai loài lan này (Koravisd Nathalang 2011) [74].
Năm 2002, Nihar Ranjan Nayak et al. ñã nghiên cứu tạo protocorm từ lát cắt chồi lan D.nobile trên môi trường MS bổ sung một trong ba chất ñiều tiết sinh trưởng ZR14.0 µM, N6-benzyladenine (BA) 11.0 µM hoặc kinetin (Kn). Kết quả 80% mẫu cấy của D.nobile hình thành protocorm. Kết quả tương tự cũng ñã thu nhận ñược bởi tác giả Malabađi et al. (2004) [80] khi nuôi cấy lát cắt của chồi D.nobile trên môi trường theo Mitra et al. (1976) có bổ sung Triacontanol (TRIA) ở nồng ñộ từ 2-4mg/l.
ảnh hưởng của hàm lượng ñường trong môi trường ñến nuôi cấy in vitro lan D.nobile. Với 6 nồng ñộ saccarose (0 g L-1, 5 g L-1; 10 g L-1; 20 g L-1; 30 g
L-1 và 60 g L-1) bổ sung vào môi trường ½ MS không chứa chất ñiều tiết sinh trưởng, các tác giả nhận thấy hàm lượng ñường hầu như không ảnh hưởng ñến sự ra rễ của chồi nhưng tác ñộng ñến chiều cao và hệ số nhân chồị Nồng ñộ saccarose 60g/l cho kết quả tốt nhất với chiều cao chồi ñạt: 4.21±0.6 cm và hệ số nhân ñạt 4 lần sau 120 ngày nuôi cấỵ
Các tác giả Trung Quốc ñã tạo ñược thể PLB từ ñỉnh chồi D.nobile khi nuôi cấy trên môi trường MS có bổ sung 1-3mg/l hợp chất BẠ Các tác giả này cũng ñã thiết lập ñược hệ thống nhân nhanh PLB với hai công ñoạn là: ñầu tiên cảm ứng tạo PLB trên môi trường lỏng và sau ñó nhân PLB trên môi trường ñặc (Liao et al., 2006) [79].
Năm 2009, Rajeswari Vasudevan và Johannes van Staden [88] ñã nghiên cứu ảnh hưởng của tuổi quả D.nobile ñến khả năng nảy mầm của hạt trên môi trường MS và P668. Các tác giả này chỉ rõ: tuổi quả càng non tỷ lệ nảy mầm của hạt càng thấp và chỉ có hạt ñã ñạt 158 ngày sau khi thụ tinh mới có tỷ lệ nảy mầm cao và phát triển ñược thành chồi mầm sau 8 tuần nuôi cấỵ Sana Asghar và cộng sự (2011) [96] ñã nghiên cứu ảnh hưởng của BA, Kinetin, IBA, α.NAA và nước dừa ñến sự sinh trưởng in vitro của chồi D.nobilẹ Họ ñã xác ñịnh ñược môi trường MS bổ sung 2mg BA là tốt nhất ñể nhân nhanh chồi và môi trường MS +2mg IBA là tốt nhất cho sự ra rễ của chồị
Các công trình công bố về nuôi cấy in vitro D.chrysanthum còn khá
hạn chế. Kalyan Kumar De và cộng sự ñã nghiên cứu ảnh hưởng của nước dừa (15% và 25%) và α.NAA (0,1mg/l và 0,5mg/l) ñến sự nảy mầm của hạt tách từ quả 70 ngày tuổi trên môi trường KC. Các tác giả này ñã thu ñược kết quả là: môi trường KC + 15% nước dừa + 0,1% α.NAA cho tỷ lệ nảy mầm cao nhất (90%) và các cây con in vitro khi chuyển ra vườm ươm có tỷ lệ sống ñạt 98-99% (Kalyan Kumar De et al., 2006) [71].
Koravisd Nathalang (Thái Lan) [74] cũng ñã gieo hạt của quả
D.chrysanthum trên môi trường KC bổ sung 15% nước dừa và 1g/l than hoạt
tính. Các chồi mầm sau 8 tháng ñã ñược chuyển sang môi trường KC +15% nước dừa và bổ sung thêm α.NAA (0, 0.5, 1, 1.5, 2 và 2.5 ppm), các axít amin (200 ppm của glutamine, alanine và methionine) và saccarose (20, 40 và 60 g/l). Sau 8 tuần nuôi cấy chồi trên các môi trường khác nhau, tác giả này ñã nhận thấy môi trường chứa 60g/l saccarose cho chiều cao chồi tốt nhất (2,6cm), chồi tạo rễ tốt nhất trên môi trường bổ sung 0,5 ppm α.NAA (4,8 rễ/chồi) và nồng ñộ 2,5ppm α.NAA kích thích sự hình thành lá của các chồi mới (3,53 lá/chồi) (Koravisd Nathalang, 2011) [74].
Trong khi trên thế giới có nhiều tác giả công bố về nuôi cấy in vitro
lan Hoàng thảo D.nobile và D.chrysanthum như ñã nêu trên thì ở Việt Nam việc nhân giống in vitro hai loài lan quý hiếm này hầu như chưa ñược ñề cập ñến. Do ñó, ñề tài nghiên cứu của chúng tôi là hết sức cần thiết ñể tạo nền móng cho việc bảo tồn và phát triển 02 loài lan D.nobile và D.chrysanthum theo hướng làm dược liệu ở Việt Nam.