Chƣơng 2 NGUYÊN VẬT LIỆU, TRANG THIẾT BỊ, ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1 Chuẩn bị mẫu
2.3.1. Chuẩn bị mẫu
Dãy dung dịch chuẩn: Từ dung dịch chuẩn gốc C0 (100µg/ml) pha dãy các dung dịch chuẩn: 10,0µg/ml, 5,0µg/ml, 2,5µg/ml, 1,0µg/ml, 0,5µg/ml và 0,05µg/ml trong pha động, trong quá trình thực nghiệm, các dung dịch chuẩn này đƣợc bảo quản trong tủ lạnh nhiệt độ ≤ 4o
C.
Mẫu thử TTX thô (dung dịch A): cân chính xác 1,25mg bột TTX thô vào bình định mức 50,0ml, thêm 30ml dung dịch acid acetic 20% trong methanol, lắc siêu âm 15 phút, thêm dung dịch acid acetic 20% trong methanol vừa đủ 50ml.
27
Mẫu thử bột đông khô TTX 0,1% (dung dịch B): cân chính xác khoảng 25mg bột đông khô TTX 0,1% vào bình định mức 10,0ml, thêm 7ml pha động, lắc siêu âm 15 phút, thêm pha động vừa đủ 10,0ml, lọc qua màng lọc 0,45µm.
Mẫu placebo (dung dịch C): Mẫu placebo là bột đông khô tá dƣợc dùng bào chế bột đông khô TTX 0,1% nhƣng không chứa TTX. Cân chính xác khoảng 25,0mg mẫu placebo vào bình định mức 10,0ml, thêm 7ml pha động, lắc siêu âm 15 phút, thêm pha động vừa đủ 10,0ml, lọc qua màng lọc 0,45µm.
Mẫu trắng: dung môi pha mẫu.
Mẫu thêm chuẩn: sử dụng một lƣợng mẫu thử bột đông khô TTX 0,1%, thêm chính xác một lƣợng mẫu chuẩn đã biết để tạo thành mẫu đánh giá độ thu hồi của phƣơng pháp định lƣợng.
- Dung dịch thêm chuẩn TC1: Cân chính xác khoảng 12,5mg mẫu palcebo vào bình định mức 5,0ml, thêm khoảng 3ml pha động, lắc siêu âm trong 15 phút, thêm chính xác 0,100ml dung dịch chuẩn C0, lắc đều, thêm pha động vừa đủ 5,0ml, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45µm. - Dung dịch thêm chuẩn TC2: Cân chính xác khoảng 12,5mg mẫu
palcebo vào bình định mức 5,0ml, thêm khoảng 3ml pha động, lắc siêu âm trong 15 phút, thêm chính xác 0,125ml dung dịch chuẩn C0, lắc đều, thêm pha động vừa đủ 5,0ml, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45µm. - Dung dịch thêm chuẩn TC3: Cân chính xác khoảng 12,5mg mẫu
palcebo vào bình định mức 5,0ml, thêm khoảng 3ml pha động, lắc siêu âm trong 15 phút, thêm chính xác 0,150ml dung dịch chuẩn C0, lắc đều, thêm pha động vừa đủ 5,0ml, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45µm.