Cùng với các phƣơng pháp khác, NMR cũng đƣợc phát triển và thƣờng dùng để nhận biết TTX trong nhiều nghiên cứu. NMR có thể giúp xác định TTX và các analog của TTX. Khó khăn với NMR là sự cản trở mạnh của các chất có trong thành phần chiết xuất TTX từ mẫu thực gây ảnh hƣởng tới chất lƣợng phổ [55].
Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân là một phƣơng pháp phổ hiện đại và hữu hiệu nhất hiện nay đƣợc dùng để xác định cấu trúc hóa học các hợp chất hữu cơ nói chung và hợp chất thiên nhiên nói riêng. Với việc sử dụng kết hợp các
19
kỹ thuật phổ NMR một chiều và hai chiều, ngƣời ta có thể xác định chính xác cấu trúc của hợp chất, kể cả cấu trúc lập thể của phân tử. Nguyên lý chung của các phƣơng pháp phổ NMR (phổ proton và phổ cacbon) là sự cộng hƣởng của các tần số khác nhau của các hạt nhân từ (1H, 13C) dƣới tác dụng của từ trƣờng. Các tần số cộng hƣởng khác nhau này đƣợc biểu diễn bằng độ dịch chuyển hóa học. Ngoài ra đặc trƣng của phân tử còn đƣợc xác định dựa vào tƣơng tác spin giữa các hạt nhân từ với nhau [15], [37].
Phổ 1H-NMR:
Trong phổ 1H-NMR, độ dịch chuyển hóa học () của các proton đƣợc xác định trong thang từ 0-14μg/ml tùy thuộc vào mức độ lai hóa của nguyên tử cũng nhƣ đặc trƣng riêng của từng phân tử. Mỗi loại proton cộng hƣởng ở một trƣờng khác nhau vì vậy chúng đƣợc biểu diễn bằng một độ dịch chuyển khác nhau. Dựa vào những đặc trƣng của độ dịch chuyển hóa học cũng nhƣ tƣơng tác spin giữa các hạt nhân từ với nhau mà ngƣời ta có thể xác định đƣợc cấu trúc hóa học của hợp chất [15], [37].
Phổ 13C-NMR
Phổ này cho tín hiệu vạch phổ của cacbon, mỗi nguyên tử cacbon sẽ cộng hƣởng ở một trƣờng khác nhau và cho một tín hiệu phổ khác nhau. Thang đo phổ 13
C-NMR cũng đƣợc tính bằng μg/ml và với dải thang đo rộng hơn so với phổ proton (từ 0 đến 240μg/ml).
Phổ HSQC(Heteronuclear Single Quantum Coherence)
Các tƣơng tác trực tiếp C-H đƣợc xác định nhờ vào các píc giao nhau trên phổ HSQC. Trên phổ này, một trục là phổ 1H-NMR còn trục kia là 13C- NMR.
Phổ HMBC (Heteronuclear Multiple Bond Correlation)
Đây là phổ biểu diễn các tƣơng tác xa của C và H trong phân tử. Nhờ vào các tƣơng tác trên phổ này mà từng phần của phân tử cũng nhƣ toàn bộ phân tử đƣợc xác định về cấu trúc [15], [37].
20
Phƣơng pháp HNMR đƣợc sử dụng để định tính TTX và các analog của TTX. Tuy nhiên, xử lý mẫu phức tạp do mẫu cần đƣợc làm sạch tốt để tiến hành phân tích.