chiết từ hải miên (Spongia sp.)
Kết quả thí nghiệm ảnh hưởng của thời gian chiết đến hoạt tính chống oxy hĩa
và hàm lượng protein của dịch chiết từ hải miên (Spongia sp.) được trình bày ở đồ
Hình 3.3. Ảnh hưởng của thời gian chiết (phút) đến khả năng khử gố tự do DPPH (a), tổng năng lực khử dịch (b) và hàm lượng protein (c) của dịch chiết
Số liệu trên đồ thị là giá trị trung bình của 3 lần thí nghiệm ± SD. Các ký tự khác nhau thể hiện sự khác biệt cĩ ý nghĩa thống kê (P<0,05).
Kết quả thí nghiệm trên hình 3.3. cho thấy khi chiết với thời gian 15 (phút), thu được dịch chiết cĩ khả năng khử gốc tự do, tổng năng lực khử và hàm lượng protein cao nhất.
Hình 3.3a cho thấy nồng độ DPPH bị khử TB 3 lần chiết sau pha lỗng cho thấy rằng khi chiết ở các thời gian khác nhau điều cĩ xu hướng tăng dần, nhưng lại thể hiện khĩ nhận biết thời gian nào là cao nhất, ta nhìn thấy rằng ở các thể tích dịch chiết khác nhau lại cho thấy sự tăng giảm khác nhau, ở thời gian 15 và 25 (phút) tại thể tích dịch chiết là 0,2 (ml) nồng độ DPPH bị khử tăng cao hơn 5,10 và 20 (phút) nhưng sau đĩ lại tăng thấp dần. Hình 3.3b cho thấy tổng năng lực khử dịch chiết TB 3 lần chiết cũng thể hiện sự thay đổi tăng dần ở các thời gian chiết khác nhau, nhưng tổng năng lực tương đương số mg BHT/ml ở các thể tích khác nhau điều thây đổi tăng giảm khác nhau ta khĩ nhận biết được thời gian nào thích hợp nhất cho tách chiết, thể hiện rõ là ở thể tích dịch chiết 0,2 (ml) thời gian 15 (phút) cao hơn 10 (phút) nhưng ở 0,5 (ml) thì lại thấp hơn. Như vậy, để dễ dàng nhận thấy dượcđiều kiện chiết thích hợp nhất ta thực hiện tính IC50 cho khả năng khử gốc tự do của DPPH và tổng năng lực khử. Hình 3.3c cho thấy nồng độ protein 3 lần chiết sau pha lỗng, ở đồ thị này sự chênh lệch về nồng độ được thể hiện rất rõ rệt. Cùng ở một hàm lượng dịch mẫu là 0,3ml nhưng ở các thời gian khác nhau thì nồng độ protein cho được khác nhau, từ 5 đến 15 (phút) nồng độ protein tăng lên dần cĩ sự khác biệt khác nhau cĩ ý nghĩa thống kê (p<0,05), nhưng từ 15 đến 25 (phút) lại giảm dần khơng cĩ sự khác biệt khác nhau cĩ nghĩa thống kê (p>0,05).Thời gian 15 (phút) là cao nhất.
Trong điều kiện khả năng khử gốc tự do DPPH và tổng năng lực khử được phân tích với nhiều thể tích khác nhau, để so sánh thowngf dựa vào giá trị IC50 . Giá
trị IC50 là thể tích dịch chiết cĩ khả năng khử được 50% gốc tự do DPPH hoặc tổng
năng lực khử trong điều kiện thí nghiệm được xác định từ mối quan hệ tuyến tính giữa thể tích dịch chiết và khả năng khử gốc tự do DPPH hoặc tổng năng lực khử.
Kết quả tính được thể hiện ở hình 3.4.
Hình 3.4. Ảnh hưởng của thời gian đến hoạt tính chống oxy hĩa của dịch chiết từ hải miên (Spongia sp.) thể hiện qua giá trị IC50, (a): khả năng khử gốc tự do
DPPH, (b): Tổng năng lực khử.
Kết quả từ đồ thị hình 3.4. cho thấy khi kéo dài thời gian chiết từ 5 phút đến 15 phút thì giá trị IC50 ở (a) giảm dần từ 0,065 xuống 0,039 (ml), ở (b) giảm từ 0,094 xuống 0,058 (ml). Như vậy, khả năng khử gốc tự do và tổng năng lực khử của dịch chiết tăng đều (p<0,05). Tuy nhiên, khi tăng thời gian từ 15 phút lên 25 phút thì khơng tăng nữa (p>0,05), giảm dần từ từ, (a) giá trị IC50 tăng từ 0,039 lên 0,048 (ml) và (b) tăng từ 0,058 lên 0,092 (ml).
Điều này được giải thích là theo định luật Fick, thời gian ảnh hưởng đến hiệu quả của quá trình chiết, thời gian chiết càng dài thì hiệu quả quá trình chiết càng
cao, tuy nhiên đến một giới hạn nào đĩ khi tiếp tục kéo dài thời gian chiết thì hiệu quả quá trình chiết khơng tăng nữa. Khi kéo dài thời gian chiết, tốc độ chiết giảm dần theo thời gian chiết, khi thời gian kéo dài tới hạn độ nhất định lượng tăng lên của chất tan phân ly được khơng lớn. Khi thời gian chiết ngắn thì các chất chống oxy hĩa cĩ trong hải miên chưa bị hịa tan hết nên hoạt tính chống oxy hĩa của dịch chiết thấp, khi tăng thời gian chiết lên sẽ tạo điều kiện cho dung mơi thấm sâu vào nguyên liệu, hịa tan các chất chống oxy hĩa cĩ trong hạt và khuếch tán vào dịch chiết. Do đĩ, hoạt tính chống oxy hĩa của dịch chiết tăng.
Phân tích kết quả thống kê cho thấy tương ứng với thời gian chiết 15, 20 và 25 phút khơng cĩ sự khác biệt đáng kể (p>0,05). Như vậy thời gian chiết tối ưu cho quá trình chiết là 15 phút và là thơng số cố định cho các thí nghiệm tếp theo.