Trong vector biểu hiện pET22trx, hoạt động của gen ha5-l được đặt dưới sự điều khiển của operater lac với cơ chế kiểm soát chặt chẽ bởi chất cảm ứng IPTG. Theo các nghiên cứu trước, tế bào thường được cảm ứng và sinh tổng hợp protein tốt nhất khi chúng đang trong pha sinh trưởng log. Vì vậy, trong thí nghiệm này, tế bào cũng được nuôi ở 37oC đến khi OD600 đạt khoảng 0,5-0,8 thì bổ sung IPTG nồng độ 0,5 mM để cảm ứng sinh tổng hợp TrxHA5-1. Kết quả phân tích protein tổng số của tế bào E. coli tái tổ hợp cho thấy, TrxHA5-1 đã được biểu hiện với kích thước khoảng 57,5 kDa đúng như dự đoán (Hình 3.4). Dòng đối chứng là chủng E. coli BL21 mang vector pET22Trx cũng tổng hợp ra Trx có kích thước 22 kDa. Các protein tái tổ hợp (Trx và TrxHA5-1) được tổng hợp với hàm lượng lớn hơn hẳn so với các protein khác của vi khuẩn.
Khác với các protein tái tổ hợp khác, nhiều loại protein tái tổ hợp dùng làm vaccine được biểu hiện trong E. coli dưới dạng không tan vì chúng có tính sinh miễn dịch mạnh hơn protein tan. Điển hình như protein sán dây Taenia ovis cũng được biểu hiện trong E. coli dưới dạng không tan dung hợp với protein GST - 45W(B/X). Kháng nguyên dạng không tan và tan trong Ure đều có tính sinh miễn dịch mạnh chống lại sán. Đồng thời một số protein khác như kháng nguyên F2 của
Plasmodium falciparum gây bệnh sốt rét cũng được biểu hiện trong E. coli dưới
Hình 3.4: Protein tổng số từ các chủng tái tổ hợp E. coli BL21; 1: Thang Protein chuẩn
(Fermentas); 2: E. coli BL21 mang vector pET22Trx; 3: E. coli BL21 mang vector pET22Trxha5-1 TrxHA5-1 kDa 116 66 45 35 25 18.4 14,4 Trx 1 2 3
37
dạng không tan và được thử nghiệm làm vaccine, protein vỏ virus gây bệnh
Leukaemia typ 1 ở người được biểu hiện trong tế bào côn trùng dưới dạng không tan và cũng đã được thử nghiệm làm vaccine. Trong nghiên cứu này chúng tôi cũng mong muốn sản xuất được protein tái tổ hợp ở dạng không tan, thuận lợi cho quá trình tinh chế và có thể chúng có tính sinh miễn dịch cao hơn dạng tan. Để định hướng protein tổng hợp ra dưới dạng không tan, chúng tôi đã nuôi cấy vi khuẩn cho sinh tổng hợp protein ở nhiệt độ 37o
C.
Kết quả phân tích pha protein tan và không tan ở hình 3.5 cho thấy, hầu hết protein tái tổ hợp TrxHA 5-1 được tổng hợp ra nằm trong pha không tan . Ngoài ra, có thể có một lượng nhỏ protein được tổng hợp dưới dạng tan có kích thước tương đương TrxHA5-1 nhưng chúng tôi chưa khẳng định được đó là protein TrxHA5-1 hay protein của vi khuẩn vì hàm lượng không nhiều.