ADN tổng số của 62 nguồn gen lúa ựược tách chiết theo quy trình tách chiết sử dụng CTAB của Keb-Llanes (2002) [55]:
1)Lấy khoảng 1-2g lá mạ (2 tuần tuổi) nghiền với nitơ lỏng trong ống eppendorf thành dạng bột mịn;
2)Thêm 1ml dịch chiết (0,1M Tris-Cl, pH8; 0,05M EDTA; 0,5M NaCl; 0,01M β-mercaptoethanol) và 50ộl 10% SDS;
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 49
4)Thu lấy dịch lỏng ở phắa trên cho vào ống eppendorf mới và thêm vào ựó một thể tắch tương ứng isopropanol, lắc nhẹ;
5)Ủ trong tủ ựá 10-30 phút;
6)Ly tâm với tốc ựộ 13000v/p trong 10 phút;
7)Bỏ pha nước, thêm vào 400ộl TE ựể hoà tan kết tủa DNA; 8)Thêm 1ộl Rnase (10mg/ộl);
9)Ủ mẫu ở 37oC trong 2h;
10)Thêm 400ộl ựệm CTAB (0,2M Tris-Cl, pH7,5; 0,05M EDTA; 2M NaCl; 2%(w/v) CTAB);
11) Ủ ở 65oC trong 15 phút. Trong khi ủ thỉnh thoảng lắc nhẹ;
12) Thêm 800ộl Chloroform/isoamyl alcohol tỷ lệ 24/1 và lắc ựều thành dạng sữa;
13) Tiếp tục ly tâm với tốc ựộ 13000v/p trong 5phút;
14) Chuyển phần dịch trong phắa trên sang ống eppendorf mới, thêm 1,4ml ethanol 96% và ủ ở nhiệt ựộ phòng trong 15 phút;
15) Ly tâm với tốc ựộ 13000v/p trong 10 phút, loại phần dịch và thêm vào 400ộl ethanol 70%;
16)Ly tâm với tốc ựộ 13000v/p trong 5 phút, loại bỏ ethanol, cho vào máy quay khô;
17) Hoà tan ADN trong 200ộl H2O (hoặc TE); 18) Bảo quản ở nhiệt ựộ -20oC ựể dùng dần.