Hoạt hóa và nuôi cấy các chủng vi khuẩn lactic sinh bacteriocin

L ỜI CẢM ƠN

2.2.1. Hoạt hóa và nuôi cấy các chủng vi khuẩn lactic sinh bacteriocin

Hình 2.2. Sơ đồ quy trình hoạt hóa và nuôi cấy vi khuẩn

 Hoạt hóa

Mục đích: ổn định đặc tính sinh học của vi khuẩn và tùy mục đích nghiên cứu mà ta hoạt hóa ở một tỉ lệ khác nhau.

Các chủng vi khuẩn được hoạt hóa trên môi trường tương thích với mỗi chủng. Nếu hoạt hóa chủng từ giống gốc trong ống eppendorf được giữ trong tủ đông sâu thì trước khi sử dụng giống ta phải lấy ống giống từ tủ đông sâu để vào

Chủng gốc Hoạt hóaở 37⁰C, 20 giờ Ủ ở 37^oC hoặc lắc trong 15-20 giờ Đo OD600 Nuôi cấy Ủ ở 37^oC trong 12-15 giờ

ngăn mát của tủ lạnh (4^oC) khoảng 15 phút để tránh hiện tượng sốc nhiệt gây ảnh hưởng tới các đặc tính sinh học của vi khuẩn.

Ủ dịch hoạt hóa trong tủ ấm 37⁰C. Thời gian hoạt hóa là khoảng từ 15-20 giờ là tốt nhất. Nuôi cấy chủng vi khuẩn sang môi trường mới khi chúng đang sinh trưởng ở pha log, trong thời gian này tế bào vi khuẩn đang ở trạng thái sinh lý tốt nhất.

 Nuôi cấy

Mục đích: ổn định hoạt tính sinh học, tăng sinh khối và khả năng sinh tổng hợp các chất.

Sau khi hoạt hóa ta hút dịch vi khuẩn đã hoạt hóa vào môi trường nuôi cấy. Đối với các chủng vi khuẩn lactic trước khi chuyển sang môi trường nuôi cấy thì ta tiến hành đo OD600 để xác định khả năng sinh trưởng của vi khuẩn trên môi trường nuôi cấy. Từ kết quả OD600 xác định tương đối lượng dịch vi khuẩn lactic đã hoạt hóa đưa vào môi trường nuôi cấy tương ứng, dịch vi khuẩn khi bắt đầu nuôi cấy có OD600 bằng khoảng 0,06. Ủ dịch vi khuẩn trong tủ ấm ở 37^oC trong thời gian 12-15 giờ, sau đó ly tâm lấy dịch bacteriocin thô để xác định hoạt tính, vì trong thời gian này bacteriocin được sinh ra là nhiều nhất [4].