L ỜI CẢM ƠN
2.1.5. Hóa chất, môi trường và thuốc thử
a) Môi trường tăng sinh APW (Alkaline Peptone Water)
Pepton : 10 g Natri clorua (NaCl) : 30 g Nước cất : 1 lít pH = 8,5 ± 0,2
Hòa tan các thành phần, chỉnh pH theo yêu cầu rồi chia vào các bình tam giác dung tích 100 ml, mỗi bình 20 ml. Đậy nút bông, giấy bạc rồi đem hấp ở
1210C trong 10 phút. Việc bao gói phải thật kín và cẩn thận để sau khi khử trùng không bị bật nút rất dễ nhiễm vi sinh vật, tránh mấtnước và làm pH thay đổi.
b) Môi trường phân lập MRS (Lactobaccillus MRS Broth)
Thành phần môi trường tổng hợp MRS Broth
Hòa tan 55,15 g môi trường MRS Broth tổng hợp với 1000 ml nước cất, đem hấp khử trùng ở 1210C trong thời gian 15 phút. Nếu pha môi trường MRS đặc thì bổ sung thêm 20 g/l môi trường, hòa tan đều thạch agar rồi phân phối vào các bình tam giác.
c) Môi trường nuôi cấy TSB (Trypton Soy Broth)
Hòa tan 30 g môi trường TSB tổng hợp trong 1000 ml nước cất, chuẩn pH, sau đó đem rót môi trường vào các bình tam giác, làm nút bông và giấy bạc, hấp khử trùng ở
1210C trong thời gian 15 phút.
d) Môi trường thử hoạt tính TSA (Tryptone Soya Agar)
Môi trường TSA được pha từ môi trường TSB có bổ sung thêm 1 % thạch agar.
e) Môi trường nuôi cấy XLD (Xylose Lysine Desoxycholate Agar)
Đun sôi môi trường, không hấp, để nguội đến 500C rồi đổ đĩa và không giữ quá 1 ngày.
f) Môi trường nuôi cấy RV (Rappaport Vassiliadis)
Môi trường cơ bản phải được chuẩn bị cùng ngày kết hợp các thành phần để có môi trường hoàn chỉnh. Vì MgCl2 hút ẩm rất mạnh và nồng độ chính xác của MgCl2 trong môi trường RV là rất quan trọng nên hòa tan hết lượng MgCl2 trong lọ mới cho vào nước cất. Dung dịch MgCl2 giữ trong chai tối màu ở nhiệt độ phòng đến 1 năm. Dung dịch Malachite green oxalate giữ trong chai tối màu ở nhiệt độ phòng đến 6 tháng.
Phân phối 10 ml môi trường hoàn chỉnh vào các ống nghiệm. Hấp khử trùng ở 1150C, 15 phút. pH cuối 5,5 ± 0,2. Giữ trong tủ lạnh và sử dụng trong vòng 1 tháng. Môi trường này nên chuẩn bị từng thành phần riêng biệt. Không nên sử dụng môi trường thương mại dạng khô. Môi trường thương mại dạng khô cũng giữ trong tủ lạnh (4-80C), thời gian 1 tháng.
g) Dung dịch nước muối sinh lý
Hoà tan 8,5 g NaCl trong 1 lít nước cất. Hấp khử trùng ở nhiệt độ 1210C trong 15 phút rồi để nguội.
h) Dung dịch xanh methylen
Dung dịch xanh methylen ở nồng độ 0,4 % (w/v) đã được sử dụng để tạo màu cho môi trường trong các thí nghiệm thử vòng kháng khuẩn.
