M Ở ĐẦU
5. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của luận văn
3.3.3. Kết quả của các mẫu bệnh nhân có đột biến mất đoạn dạng α3,7
Hình 3.3. Kết quả phân tích gen α globin mẫu bệnh nhân HBA16
Màu đỏ (bên trái): mẫu đối chứng. Màu xanh (bên phải): mẫu bệnh nhân HBA16
Nhận xét: Tỷ lệ chiều cao đỉnh đoạn dò của bệnh nhân/mẫu đối chứng ở các đoạn dò có số thứ tự 14, 15 có giá trị gần bằng 1. Trong khi đó tỷ lệ đoạn dò có số thứ tự 11, 16, 17, 19, 23, 26, 27 có giá trị xấp xỉ 0,5 và tỷ lệ đoạn dò có số thứ tự 24, 25 có giá trị xấp xỉ 0,75. Các chỉ số này phù hợp với chỉ số mong đợi về các dạng đột biến SALSA MLPA probemix P140-B4 HBA đưa ra và chứng tỏ mẫu HBA16 có đột biến gây bệnh thalassemia dạng dị hợp -α3,7
50
Hình 3.4. Kết quả phân tích gen α globin mẫu bệnh nhân HBA26
Màu đỏ (bên trái): mẫu đối chứng. Màu xanh (bên phải): mẫu bệnh nhân HBA26.
Nhận xét: Tỷ lệ chiều cao đỉnh đoạn dò của bệnh nhân/mẫu đối chứng ở các đoạn dò có số thứ tự 14, 15 có giá trị gần bằng 1. Trong khi đó tỷ lệ đoạn dò có số thứ tự 11, 16, 17, 19, 23, 26, 27 có giá trị xấp xỉ 0,5 và tỷ lệ đoạn dò có số thứ tự 24, 25 có giá trị xấp xỉ 0,75. Các chỉ số này phù hợp với chỉ số mong đợi về các dạng đột biến SALSA MLPA probemix P140-B4 HBA đưa ra và chứng tỏ mẫu HBA26 có đột biến gây bệnh thalassemia dạng dị hợp -α3,7/αα.
Bàn luận: Dựa vào bảng 2.2, cũng như số liệu về tỷ lệ chiều cao các đỉnh trong hình ảnh điện di mao quản của các bệnh nhân, nghiên cứu đã xác định được 10 mẫu có đột biến dạng dị hợp -α3,7
/αα, trong đó có bệnh nhân mã số HBA16 và HBA26. Đối với trường hợp đột biến dạng -α3,7
/αα cần chú ý đến các đoạn dò có số thứ tự 11, 16, 17, 19, 23, 26, 27, các đoạn dò này phải có tỷ lệ các đỉnh bệnh nhân/đối chứng gần bằng 0,5; tỷ lệ đoạn dò có số thứ tự 24, 25 có giá trị xấp xỉ 0,75; còn các đoạn dò có số thứ tự 14, 15 có tỷ lệ các đỉnh bệnh nhân/đối chứng gần bằng 1.
Điều quan trọng là ta phải chú ý đến đoạn dò số 24, 25 vì các đoạn dò này lần lượt dò tìm exon 1, exon 3 trên cả hai gen HBA1, HBA2 nên tỷ lệ của chúng trong trường hợp đột biến - α3,7/αα gần bằng 0,75. Đột biến dạng -α3,7/αα là đột biến mất 1 gen α globin khá phổ biến và
51
đoạn bị mất dài khoảng 3,7 kb (đoạn này nối giữa 2 trình tự tương đồng Z của 2 gen α globin) [32]. Để thuận tiện cho việc phân biệt giữa 2 dạng đột biến -α3,7/αα , -α4,2/αα thì khi xác định dạng đột biến ta chú ý đến đoạn dò số 11 (220 nt), 16 (256 nt), 17 (190 nt), 19 (337 nt). Nếu các đoạn dò này có tỷ lệ đỉnh bệnh nhân/đối chứng gần bằng 0,5 thì chứng tỏ mẫu có đột biến - α3,7/αα, trong trường hợp này các đoạn dò trên không thể bắt cặp được, do vậy không được khuếch đại trong phản ứng PCR nên đỉnh tín hiệu (lượng sản phẩm) giảm đi 0,5. Khác với trường hợp đột biến mất đoạn dạng -α4,2/αα, các đoạn dò 11, 16, 17 và 19 có tỷ lệ đỉnh bệnh nhân/đối chứng gần bằng 1 (hình 3.5).
Khảo sát các đoạn dò bắt cặp với các gen tham khảo, ta thấy tỷ lệ đỉnh bệnh nhân/đối chứng nằm trong khoảng 0,8 - 1,2. Điều này chứng tỏ kết quả rất đáng tin cậy. Vì các đoạn gen tham khảo nằm trên các nhiễm sắc thể khác nhau nên tỷ lệ các đoạn dò dò tìm các đoạn gen tham khảo này phải có tỷ lệ tương đương nhau giữa mẫu đối chứng và mẫu bệnh nhân, chúng đóng vai trò quan trọng trong việc xác định kết quả của phản ứng MLPA có đáng tin cậy hay không.
Hình 3.5. Vị trí đoạn dò dò tìm trình tự tương tứng trên cụm gen α globin giúp xác định đột biến -α3,7
52