cầu [9][12][20]
* Cấu trúc buồng đếm
Buồng đếm Goriaep là một phiến kính dày hình chữ nhật, ở phần giữa là lõm phẳng, tại đây cĩ kẻ một lưới gồm 4,5 hình vuơng cĩ diện tích tổng cộng là 1mm2 và được chia thành 25 ơ vuơng lớn (1/25 mm2 / 1 ơ). Mỗi ơ nhỏ cĩ diện tích là 1/400 mm2, mỗi ơ lớn cĩ thể tích là 4.10-6 ml.
* Cách tiến hành
Lắc mạnh dịch huyền phù, dùng pipetman nhỏ một giọt dịch huyền phù lên bề mặt khung đếm. Đặt khung đếm lên bàn kính hiển vi. Đếm ít nhất 5 ơ lớn, lấy trị số trung bình (khơng quá 10 tế bào/1 ơ nhỏ ≈ 2.5 < a <10).
* Cách tính kết quả:
Số tế bào trên 1ml mẫu phân tích (N): N (tế bào/ml) =
Trong đĩ: a: số tế bào trung bình cĩ trong một ơ lớn. v: thể tích một ơ lớn = 4 x 104.
K: hệ số pha lỗng mẫu.
Vậy N (tế bào/ml) = = 0.25 x a x K x 106.
* Định lượng tế bào bằng phương pháp đo mật độ quang
a/ Nguyên tắc
Tế bào VSV là 1 thực thể nên khi hiện diện trong mơi trường lỏng làm cản ánh sáng, làm phân tán chùm ánh sáng tới và làm đục mơi trường. Độ đục của huyền phù tỉ lệ với mật độ tế bào. Do vậy cĩ thể định lượng mật độ tế bào 1 cách gián tiếp thơng qua đo độ đục bằng máy so màu ở bước sĩng 610nm.
b/ Cách tiến hành
Xây dựng đường tương quan tuyến tính giữa độ đục và mật độ tế bào bằng cách:
- Pha lỗng 1 huyền phù chứa bào tử nấm mốc cần kiểm nghiệm cĩ mật độ bất kì thành các huyền phù khác nhau cĩ độ đục đo ở OD610nm đạt các giá trị lân cận 0.1; 0.2; 0.3; 0.4; 0.5. Đo OD610nm của các huyền phù vừa được pha, ghi nhận số đo thực tế.
- Dùng phương pháp đếm trực tiếp dưới kính hiển vi (dùng khung đếm hồng cầu), xác định mật độ tế bào (N/ml) của các huyền phù này.
- Tính giá trị log (N/ml) cho mỗi giá trị mật độ N/ml tương ứng với mỗi độ đục. Vẽ đường biểu diễn của log (N/ml) theo OD610nm.
* Xác định mật độ tế bào theo độ đục
- Đo độ đục của 1 huyền phù tế bào cần xác định mật độ.
- Từ trị số OD610nm đo được, suy ra trị số log(N/ml) và trị số mật độ N/ml (N/ml = 10avới a= log(N/ml)) từ đường chuẩn.