Trái dừa “dâu” ở các giai đoạn trái 6, 9 và 12 tháng tuổi (ở các giai đoạn này phôi đã có thể quan sát bằng mắt thường) được hái từ vườn ở Bến Tre mang lên phòng thí nghiệm. Khi tiến hành nuôi cấy mới bóc vỏ để đảm bảo phôi nằm trong trái sẽ không bị nhiễm khuẩn. Khi nuôi cấy thì mang cả trái đã được bóc sạch vỏ vào phòng cấy, dùng dao mổ tách lấy phôi nằm ở vị trí “con mắt mềm” của trái dừa và đưa trực tiếp vào ống nghiệm để nuôi cấy mà không cần qua giai đoạn khử trùng vì phôi đã được bảo vệ vô trùng trong phần cơm dừa (ảnh 2.6 – 2.7).
Phôi được nuôi cấy ở điều kiện chiếu sáng 2500 ± 200 lux (12/24 giờ), nhiệt độ 27 ± 20C, độ ẩm 71 ± 5%.
Ảnh 2.6: Vị trí phôi giai đoạn trái 6 tháng tuổi, phôi nằm trong phần cơm dừa.
Tìm hiểu ảnh hưởng của tuổi phôi trong quá trình nuôi cấy phôi
in vitro
Phôi dừa đem nuôi cấy ở ba giai đoạn trái 6, 9 và 12 tháng tuổi.
Môi trường nuôi cấy: Y3 với 60 g/l saccharose, 8 g/l agar, pH ở 0,58 ± 0,2 và bổ sung thêm IAA 0,1 mg/l và BA 1 mg/l (phụ lục 2.3).
Mỗi giai đoạn nuôi cấy 10 phôi, theo dõi tỉ lệ sống sót của phôi sau bốn tuần nuôi cấy. Tuổi phôi có sự phát triển tốt nhất được chọn để thực hiện các thí nghiệm tiếp sau.
Tìm hiểu ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy lên sự phát triển phôi hợp tử
Phôi hợp tử giai đoạn trái 12 tháng tuổi được nuôi cấy ở các môi trường khác nhau:
- MS và 30 g/l saccharose (phụ lục 2.2). - Y3 và 30 g/l saccharose.
- Y3 và 60 g/l saccharose.
Cả ba môi trường đều được thêm vào 8 g/l agar và chỉnh pH ở 0,58 ± 0,2, bổ sung IAA 0,1 mg/l và BA 1 mg/l.
Mỗi môi trường nuôi cấy 15 phôi. Sau một tháng nuôi cấy, lấy ba phôi ở mỗi môi trường đem cân trọng lượng tươi để xác định sự thay đổi trọng lượng phôi trong quá trình phát triển ở các môi trường khác nhau.
Số phôi còn lại sẽ được theo dõi khả năng nẩy mầm và tỉ lệ % sống sót của phôi sau bốn tháng nuôi cấy.
Thí nghiệm được thực hiện hai lần tại phòng nuôi cấy bộ môn Sinh lí thực vật trường Đại học Sư Phạm.
Tìm hiểu ảnh hưởng của chất điều hòa tăng trưởng thực vật trong quá trình phát triển phôi và nảy mầm
Phôi hợp tử giai đoạn trái 12 tháng tuổi được sử dụng làm thí nghiệm. Môi trường nuôi cấy: Y3 với 60 g/l saccharose, 8 g/l agar, pH ở 0,58 ± 0,2 và bổ sung thêm chất điều hòa tăng trưởng thực vật với các liều lượng và thành phần khác nhau (bảng 2.1).
Bảng 2.1: Môi trường nuôi cấy Y3 có bổ sung các chất điều hòa tăng trưởng thực vật với thành phần và liều lượng khác nhau.
Chất xử lí IAA (mg/l) BA (mg/l) 0 0 0,1 0 0 0,1 0 1 0,1 1 1 1
Mỗi môi trường nuôi cấy 10 phôi. Sau một tháng nuôi cấy, lấy ba phôi đem cân trọng lượng tươi để theo dõi sự tăng trưởng phôi ở các môi trường khác nhau. Số phôi còn lại tiếp tục nuôi cấy và khảo sát chiều cao chồi, chiều dài rễ sau ba và bốn tháng nuôi cấy.