- Nuôi cấy tế bào:
2.2.2.Nghiên cứu sự thâm nhiễm lympho bào.
Thâm nhiễm lympho bào được nghiên cứu trên bệnh phẩm là mô ung thư của bệnh nhân thuộc cả hai nhóm A và B.
Thâm nhiễm lympho bào vào mô ung thư được đánh giá theo: mức độ thâm nhiễm và dưới nhóm thâm nhiễm.
Sụ' thâm nhiễm lympho bào được đánh giá dựa trên kỹ thuật mô học thường quy .Tiêu chuẩn đánh giá xây dựng dựa trên nghiên cứu của Jass(1987) và S.Ishigami (2000)[35],[49]. Sự thâm nhiễm lympho bào được chia thành ba mức độ: không thâm nhiễm (khi dưới 50% diện cắt không xuất hiện sự thâm nhiễm), thâm nhiễm ít(khi trên 50% diện cắt xuất hiện sự thâm nhiễm và số tế bào lympho thâm nhiễm < 50 tế bào/ vi trường), thâm nhiễm nhiều (khi trên 50% diện cắt xuất hiện sự thâm nhiễm và số tế bào lympho thâm nhiễm > 50 tế bào/ vi trường). Kết quả được đọc theo phương pháp mù, độc lập bởi hai bác sĩ giải phẫu bệnh.
- Bệnh phẩm: mô ung thư, sau phẫu thuật được chuyển xuống khoa Giải phẫu bệnh học, bệnh viện Việt Đức.
- Lên tiêu bản: cắt lát mỏng 3|j.m, nhuộm bằng H&E (Hemolysin & Eosin).
- Xác định mức độ thâm nhiễm:
+ Quan sát các tiêu bản đại diện cho toàn bộ chu vi của khối u.
+ Chọn tiêu bản có sự thẫm nhiễm cao nhất để xác định số tế bào thâm nhiễm.
• Đánh giá dưới nhóm thâm nhiễm.
Nghiên cứu dưới nhóm thâm nhiễm lympho bào vào mô ung thư được tiến hành bằng kỹ thuật hoá mô miễn dịch (immunohistochemistry) theo phương pháp nhuộm gián tiếp (indirect technique) với kỹ thuật khuyếch đại bằng phức hợp avidin-biotin.
Kỹ thuật được tiến hành tại khoa Giải phẫu bệnh tế bào Bệnh viện K Hà nội; sử dụng kit LSAB®2 System (Dako Corporation).