2.1. Đối tượng nghiên cứu
Nghiên cứu được tiến hành trên các bệnh nhân ung thư dạ dầy và đại trực tràng được chẩn đoán và điều trị tại khoa Phẫu thuật tiêu hoá, bệnh viện Hữu nghị Việt Đức.
Tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân vào nhóm nghiên cứu:
> Chấp nhận tham gia vào nghiên cứu, chấp nhận truyền hoá chất sau mổ. > Tuổi dưới 70.
> Kết quả mô bệnh học khẳng định ung thư dạ dầy hoặc đại trực tràng, không phân biệt giai đoạn bệnh.
> Được phẫu thuật cắt bỏ khối u. Tiêu chuẩn loại trừ:
> Trên 70 tuổi.
> Đã được điều trị hoá chất hoặc tia xạ trước phẫu thuật.
> Mắc kèm các bệnh suy giảm miễn dịch khác như AIDS, lao, sốt rét ; ỉ
2.2. Phương pháp nghiên cứu.
Là nghiên cứu tiến cứu, thử nghiệm lâm sàng có đối chứng, phân nhóm ngẫu nhiên theo phương pháp mù đơn. Tác dụng kích thích miễn dịch của phác đồ FUFOL-ASLEM được đánh giá dựa trên các chỉ tiêu miễn dịch sau:
> Số lượng bạch cầu tổng, số lượng của các dòng bạch cầu (đánh giá theo kỹ thuật xét nghiệm thường quy phòng thí nghiệm).
> Tỷ lệ đáp ứng chuyển dạng tế bào đơn nhân máu ngoại vi (PBMC: Peripheral blood mononuclear cell) với chất kích thích phân bào (có quy trình kèm theo).
> Mức độ thâm nhiễm Lympho bào vào mô ung thư (có quy trình kèm theo).
2.2.1. Nghiên cứu chuyển dạng lympho bào
Nghiên cứu chuyển dạng lympho bào được tiến hành tại Labo Trung tâm Y sinh học, Đại học Y Hà Nội.
• Tách và nuôi cấy PBMC
- Tách PBMC bằng phương pháp ly tâm chênh lệch tỷ trọngịDensity gradient centriỷugation):
Lấy 5 ml máu vào ống nghiệm, chống đông bằng Heparin.
Pha loãng máu chống đông bằng dung dịch MEM (Gibco) với tỷ lệ 1 :1. Hút 3ml máu pha loãng cho chảy nhẹ theo thành ống nghiệm 5ml đã chứa sẵn lml Ficoll Hypacque (tỷ trọng 1,007; Lymphoprep™) tạo thành hai lớp rõ rệt.
Ly tâm 2500 vòng/phút trong 20 phút.
Hút tế bào PBMC sang ống nghiêm khác, rửa hai lần bằng dung dịch MEM, mỗi lần dùng 2ml. Lần 1 ly tâm 2000 vòng/phút trong 10 phút, lần 2 ly tâm 2000 vòng/phút trong 5 phút.
Đếm số lượng tế bào bằng buồng đếm bạch cầu.