cỏ rụ phi
ễ nhiễm Salmonella spp trong mụi trường nước ao nuụi cỏ rụ phi cú liờn quan ủến thực tế chăn nuụi gia sỳc, gia cầm khụng ủảm bảo ủiều kiện vệ sinh. Theo kết quả ủiều tra trỡnh bày ở bảng 1 cho thấy cỏc nụng hộ trong nghiờn cứu này ủều sử dụng chất thải, phõn lợn, phõn vịt, gà chua qua xử lý bổ sung trực tiếp, thường xuyờn, trong khi cỏc gia sỳc, gia cầm này là nguồn bệnh, mang và reo rắc mầm bệnh .coli và Salmonella (Trương Thị Dung, 2000 [3]), (Health Protection Agency, 2006 [49].
Tiến hành khảo sỏt sự ụ nhiễm chỉ tiờu Salmonella spp trong mụi trường nước nuụi cỏ ở 13 nụng hộ, kết quả thu ủược trỡnh bày ở bảng 3.4.
Bảng 3.4. Kết quả khảo sỏt chỉ tiờu Salmonela spp trong mụi trường nước nuụi cỏ rụ phi Số mẫu dương tớnh Kết quảủịnh lượng l (cfu/ml) TT địa ủiểm (tờn hộ) Số mẫu kiểm tra n % X . 102 mX 1 XQ 10 10 100 2,12 ổ 0,17 2 BV 10 10 100 1,01 ổ 1,81 3 VHa 10 10 100 3,24 ổ 0,56 4 VHc 10 10 100 0, 37 ổ 0,12 5 đT 10 10 100 4,18 ổ 1,16 6 PB 10 10 100 0,94 ổ 0,23 7 NN 10 10 100 1,86 ổ 0,67 8 VL 10 10 100 1,08 ổ 0,42 9 VP 10 10 100 2,16 ổ 1,08 10 CT 10 10 100 0, 36 ổ 0,14 11 VT 10 10 100 3,68 ổ 0,89 12 HN 10 10 100 1,07 ổ 0, 36 13 NM 10 10 100 1,21 ổ 0,56 Tớnh chung 130 130 100 1,79 ổổổổ 0,62
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ẦẦẦ58
Từ bảng 3.4, cỏc kết quả thu ủược cho thấy: Tất cả cỏc mẫu nước ở 13 ủịa
ủiểm khảo sỏt ủều cho kết quả dương tớnh với Salmonella spp, chiếm tỷ lệ 100%. Số
lượng Salmonella spp trung bỡnh từ 0,36.102 cfu/ml ủến 4,18.102 cfu/ml, mức ủộ ụ nhiễm cao nhất ủược phõn tớch từ mẫu nhà ụng Nguyễn đức Tuệ (4,18.102 cfu/ml) và thấp nhất là mẫu ủược phõn tớch từ nhà ụng Nguyễn Cụng Thật (0,36). Kết quả
này phản ỏnh ủỳng với thực tế ủiều tra về tỡnh trạng bài thải vi khuẩn Salmonella
spp vào mụi trường nước do hoạt ủộng chăn nuụi gia sỳc, gia cầm nhằm tận dụng chất thải của cỏc nụng hộ. Những hộ nào chăn nuụi kết hợp nhiều gia sỳc, gia cầm thỡ lượng chất thải trực tiếp vào ao nuụi lớn ủồng nghĩa với mức ủộ ụ nhiễm cỏc chỉ
tiờu vi sinh vật sẽ cao. Kết quả trờn phự hợp với cỏc nghiờn cứu của Trương Thị
Dung (2000) [3] và thụng bỏo của Health Protection Agency (2006) [49].
Từ cỏc kết quả phõn tớch ở cỏc bảng 3.2, 3.3 và 3.4 chỳng ta nhận thấy rằng hiện trạng ụ nhiễm cỏc chỉ tiờu vi sinh vật (E.coli, Salmonella spp và Aeromonas
spp) trong mụi trường nước là rất lớn ủối với những ao nuụi kết hợp giữa mụ hỡnh nuụi cỏ và chăn nuụi gia sỳc, gia cầm mà khụng quản lý tốt nguồn chất thải, thải trực tiếp xuống ao nuụi khụng qua xử lý, cũng từ kết quả của cỏc bảng trờn chỳng ta nhận thấy sự ụ nhiễm E.coli trong ao nuụi là cao nhất sau ủú ủến sự ụ nhiễm của
Aeromonas spp và cuối cựng là Salmonella spp. Qua cỏc bảng trờn chỳng ta cũng nhận thấy mức ủộ ụ nhiễm trong cỏc hộ chăn nuụi là khỏc nhau bởi số lượng gia sỳc, gia cầm của cỏc hộ cú sự dao ủộng, nhưng nhỡn chung những hộ chăn nuụi nhiều gia sỳc, gia cầm thỡ nguy cơ gõy ụ nhiễm mụi trường về cỏc chỉ tiờu vi sinh vật càng lớn: mức ủộ ụ nhiễm E.coli; Aeromonas spp và Salmonella spp của mẫu phõn tớch từ hộ nhà ụng Nguyễn đức Tuệ là (1,12.105 cfu/ml; 7,12.104 cfu/ml và 4,18.102 cfu/ml) của mẫu phõn tớch từ hộ nhà ụng Nguyễn Mẹo (3,42.105 cfu/ml; 8,02.104 cfu/ml và 1,21.102 cfu/ml) trong khi ủú mẫu phõn tớch từ nhà ụng Nguyễn Cụng Thật lần lượt là: 0,87.105 cfu/ml; 4,65.104cfu/ml và 0,36.102 cfu/ml.
3.5. Khảo sỏt nhiễm chỉ tiờu vi khuẩn E.coli trong thịt cỏ rụ phi giai
ủoạn thu hoạch
để thấy ủược sự liờn quan giữa ụ nhiễm E.coli, trong mụi trường nước và mức
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ẦẦẦ59
sỏt chỉ tiờu E.coli nhiễm trong thịt cỏ. Áp dụng phương phỏp của Peter Feng, Stephen D. Weigant, Michael A. Grant (2002) [67], cỏc kết quả thu ủược trỡnh bày
ở bảng 3.5.
Bảng 3.5: Kết qủa khảo sỏt chỉ tiờu E.coli nhiễm trong thịt cỏ rụ phi
Số mẫu dương tớnh Kết qu(cfu/gram) ả dịnh lượng TT đị(tờn ha ủiểộm ) kiSốể mm tra ẫu n % X .103 mX 1 XQ 16 2 12,50 0,29 ổ0,11 2 BV 16 3 18,75 1,26 ổ0,23 3 Vha 16 4 25,00 2,21 ổ1,02 4 VHc 16 2 12,50 1,98 ổ1,14 5 đT 16 4 25,00 0,67 ổ0,51 6 PB 16 2 12,50 0,56 ổ0,13 7 NN 16 3 6,25 0,79 ổ0,26 8 VL 16 1 18,75 2,18 ổ0,12 9 VP 16 3 18,75 3,02 ổ0,68 10 CT 16 3 18,75 1,56 ổ1,03 11 VT 16 5 31,25 1,61 ổ0,12 12 HN 16 3 18,75 0,72 ổ0,32 13 NM 16 4 25,00 1,24 ổ0,28 Tớnh chung 208 39 18,75 1,38 ổ0,45
Từ bảng 3.5, cỏc kết quả thu ủược cho thấy: đó phỏt hiện từ 6,25% ủến 31,25% số mẫu cỏ bị nhiễm E.coli. Số lượng vi khuẩn trong mẫu thịt cỏ dao ủộng ở
mức từ 0,29.103 cfu/g ủến 3,02.103 cfu/g mặc dự khi kiểm tra cảm quan khụng thấy cú biểu hiện bất thường. Mẫu phỏt hiện nhiễm cao nhất (3,02.103cfu/g) ủược phõn tớch từ mẫu thu tại ao nhà ụng Nguyễn Văn Phụng và mẫu cú số lượng E.coli thấp nhất ủược tỡm thấy từ mẫu thu tại nhà ụng Mai Xuõn Quang (0,29.103 cfu/g). Ao nuụi cú tỉ lệ nhiễm cao nhất ủú là ao nuụi nhà ụng Lờ Văn Tuyền (31,25%), tiếp ủến là Nguyễn Văn Hải, Nguyễn đức Tuệ và Nguyễn Mẹo (25%) và ao cú tỉ lệ nhiễm thấp nhất ủú là ao nhà ụng Trần Văn Lành (6,25%). Qua kết quả bảng trờn cho chỳng ta thấy mức ủộ và tỉ lệ nhiễm E.coli trờn thịt cỏ cú liờn quan ủến tỉ lệ và mức
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ẦẦẦ60 ủộ ụ nhiễm E.coli trong nguồn nước ao nuụi, thường những ao nuụi nào cú sự ụ nhiễm về E.coli nhiều sẽ dẫn ủến khả năng xõm nhiễm của E.coli vào cỏ sẽ lớn (Trần Văn Lành: 5,67.105 cfu/ml - 18,75% và 2,18.103 cfu/g) cũn những ao cú sự ụ nhiễm về E.coli thấp thỡ khả năng xõm nhiễm của chỳng vào cỏ cũng thấp (Nguyễn Nho Nhụ: 4,35.105 cfu/ml - 6,25% và 0,79.103 cfu/g ). Kết quả này phự hợp với những nghiờn cứu về mối liờn quan giữa E.coli; Salmonella spp trong thức ăn, mụi trường sống và dịch bệnh trờn gia suc, gia cầm của Tống Vũ Thắng và đậu Ngọc Hào, 2008 [24].
3.6. Khảo sỏt nhiễm chỉ tiờu Aeromonas spp trong thịt cỏ rụ phi giai ủoạn thu hoạch
Tiến hành khảo sỏt chỉ tiờu nhiễm Aeromonas spp trong thịt cỏ rụ phi. Áp dụng phương phỏp của Raafat A. M. Elbassuony (2005) [71], cỏc kết quả thu ủược trỡnh bày ở bảng 3.6.
Bảng 3.6. Kết quả khảo sỏt chỉ tiờu Aeromonas spp nhiễm trong thịt cỏ rụ phi
Số mẫu dương tớnh Kết qu(cfu/gram) ả dịnh lượng TT đị(tờn ha ủiểm ộ) kiSốể mm tra ẫu n % X .102 mX 1 XQ 16 2 12,50 0,91 ổ0,12 2 BV 16 2 12,50 2,14 ổ0,03 3 Vha 16 3 18,75 1,62 ổ0,62 4 VHc 16 2 12,50 2,34 ổ1,09 5 đT 16 4 25,00 0,92 ổ0,16 6 PB 16 2 12,50 0,71 ổ0,21 7 NN 16 1 6,25 0,36 ổ0,16 8 VL 16 1 6,25 2,12 ổ0,91 9 VP 16 2 12,50 1,23 ổ0,18 10 CT 16 2 12,50 0,39 ổ1,23 11 VT 16 4 25,00 2,83 ổ0,26 12 HN 16 1 6,25 1,53 ổ0,61 13 NM 16 3 18,75 1,58 ổ0,39 Tớnh chung 208 29 13,94 1,43 ổ0,45
Từ bảng 3.6, cỏc kết quả thu ủược cho thấy: đó phỏt hiện mẫu thịt cỏ nhiễm (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ẦẦẦ61 ủú là ao nhà ụng Nguyễn đức Tuệ và Lờ Văn Tuyền (25%) và ao nuụi cú tỉ lệ
nhiễm thấp nhất là ao nuụi nhà ụng Nguyễn Nho Nhụ, Trần Văn Lành và Nguyễn Huy Nhõn (6,25%)); số lượng vi khuẩn trong thịt dao ủộng từ 0,36.102 cfu/gram ủến 2,83.102 cfu/g (mẫu phỏt hiện nhiễm cao nhất là mẫu ủược phõn tớch từ ao nhà ụng Lờ Văn Tuyền (2,83.102 cfu/g) và mẫu cú số lượng Aeromonas spp thấp nhất ủược phõn tớch từ mẫu thu tại nhà ụng Nguyễn Nho Nhụ (0,36.102 cfu/g)). Kết quả này tương tự kết quả của Raafat A. M. Elbassuony (2005) [71] trong cỏc nghiờn cứu về
tỡnh hỡnh nhiễm Aeromonas spp trờn cỏ rụ phi nhưng thấp hơn kết quả của Lý Thị
Thanh Loan (2002) [12] khảo sỏt trờn cỏ ba -sa ở An Giang và Bến Tre; Hassan, 2006 khi nghiờn cứu mức ủộ nhiễm Aeromonas trờn cỏ ủó cho kết quả 5,4x105 cfu/g
ủến 5,2x106 cfu/g.
3.7. Khảo sỏt nhiễm chỉ tiờu vi khuẩn Salmonella spp trong thịt cỏ rụ phi
Tiến hành khảo sỏt chỉ tiờu nhiễm Salmonella spp trong thịt cỏ rụ phi ỏp dụng theo ISO cho 25 gam mẫu thịt cỏ, kết quả thu ủược trỡnh bày ở bảng 3.7.
Bảng 3.7. Kết quả khảo sỏt chỉ tiờu Salmonella spp nhiễm trong thịt cỏ rụ phi
Số mẫu dương tớnh TT địa ủiểm (tờn hộ) Số mẫu kiểm tra n % 1 XQ 16 1 6,25 2 BV 16 4 25,00 3 VHa 16 3 18,75 4 VHc 16 2 12,50 5 ĐT 16 4 25,00 6 PB 16 2 12,50 7 NN 16 1 6,25 8 VL 16 1 6,25 9 VP 16 3 18,75 10 CT 16 2 12,50 11 VT 16 4 25,00 12 HN 16 3 18,75 13 NM 16 2 12,50 Tớnh chung 208 32 15,38
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ẦẦẦ62
Từ bảng 3.7, cỏc kết quả thu ủược cho thấy: đó phỏt hiện mẫu cỏ nhiễm
Salmonella spp. Tỷ lệ nhiễm từ 6,25% ủến 25,00% (Ao nuụi cú tỉ lệ nhiễm cao nhất là ao nhà ụng Nguyễn Bỡnh Vinh, Nguyễn đức Tuệ và Lờ Văn Tuyền (25%) và ao cú tỉ lệ nhiễm thấp nhất là ao nhà ụng Mai Xuõn Quang, Nguyễn Nho Nhụ và Trần Văn lành (6,25%)), trung bỡnh 15,38%. kết quả này cú liờn quan ủến kết quả phõn tớch Salmonella trong mẫu nước, những ao nào mà mức ủộ ụ nhiễm Salmonella lớn thường dẫn ủến khả năng cỏ bị nhiễm Salmonella cao hơn so với những ao cú mức
ủộ nhiễm Salmonella thấp trong nguồn nước ao nuụi. Mức ủộ nhiễm Salmonella cú liờn quan chặt chẽ ủến mụi trường sống của chỳng (Tống Vũ Thắng và đậu Ngọc Hào, 2008 [23]). Kết quả này phự hợp với thụng bỏo của Thi Thu Hao Van, George Moutafis ột al (2007) [75] về tỡnh hỡnh nhiễm Salmonella spp ở trai nước ngọt.
Qua kết quả phõn tớch ở cỏc bảng 3.5, 3.6 và 3.7 về mức ủộ ụ nhiễm E.coli;
Aeromonas spp và Salmonella spp trờn thịt cỏ rụ phi chỳng ta thấy mức ủộ ụ nhiễm
E.coli là cao nhất (103 - 39/208) sau ủú là Aeromonas spp (102 - 29/208 ) và
Salmonella spp (32/208). điều này hoàn toàn phự hợp với cỏ kết quả ủó phõn tớch về sự hiện diện của cỏc vi khuẩn này trong mẫu nước (E.coli (105) Aeromonas spp (104) và Salmonella (102)) ở cỏc bảng 3.2, 3.3 và 3.4.
Sự ụ nhiễm về E.coli, Aeromonas spp và Salmonella trờn thịt cỏ thường bị ụ nhiễm nặng bởi những mẫu cỏ thu từ cỏc ao nuụi cú sự ụ nhiễm về cỏc chỉ tiờu
ủú trong nước lớn: E.coli (Trần Văn Lành: 5,67.105 cfu/ml - 18,75% và 2,18.103 cfu/gram); Aeromonas spp (Nguyễn đức Tuệ: 7,12.104 cfu/ml - 25% và 0,92.102 cfu/gram) và Salmonella spp (Nguyễn đức Tuệ: 4,18.102 cfu/ml - 25%). Cũn những ao nuụi cú sự ụ nhiễm về cỏc chỉ tiờu trờn thấp thỡ sự ụ nhiễm trờn thịt cỏ cũng giảm.
3.8. Khảo sỏt mức ủộ nhiễm cỏc vi khuẩn E.coli, Aeromonas và Salmonella trong mẫu thịt cỏ
đó khảo sỏt mức ủộ nhiễm cỏc vi khuẩn E.coli. Aeromonas spp và Salmonella
spp trong mẫu thịt cỏ rụ phi. Kết qủa thu ủược trỡnh bày ở bảng 8.
Từ bảng 3.8, cỏc kết quả thu ủược cho thấy: đó phỏt hiện mẫu thịt cỏ rụ phi nhiễm ủồng thời cả E.coli và Aeromonas spp (5,28%); nhiễm ủồng thời E.coli và Salmonella spp (4,80%); nhiễm ủồng thời Aeromonas spp và Salmonella spp
(5.28%); nhiễm ủồng thời cả E.coli. Aeromonas spp và Salmonella spp (2,88%). Từ
kết quả trờn chỳng ta cũng dễ dàng nhận thấy tỉ lệ nhiễm ủồng thời 2 hoặc 3 loài vi khuẩn (E.coli, Aeromonas spp và Salmonella spp) là khụng nhiều, thường cỏ chỉ bị
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ẦẦẦ63
Bảng 3.8. Kết quả khảo sỏt mức ủộ nhiễm cỏc vi khuẩn E.coli, Aeromonas spp và Salmonella spp trong mẫu thịt cỏ rụ phi
Kết quả khảo sỏt mức ủộ nhiễm của vi khuẩn Aeromonas, E.coli và Salmonella
E.coli và
Aeromonas SalmonellaE.coli và (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Aeromonas và Salmonella E.coli, Aeromonas và Salmonella TT địa ủiểm kiểm tra (tờn hộ) Số mẫu n % n % n % n % 1 XQ 16 1 6,25 1 6,25 1 6,25 0 0 2 BV 16 1 6,25 0 0 1 6,25 1 6,25 3 VHa 16 1 6,25 1 6,25 1 6,25 1 6,25 4 VHc 16 1 6,25 1 6,25 1 6,25 0 0 5 đT 16 1 6,25 1 6,25 1 6,25 1 6,25 6 PB 16 1 6,25 0 0 1 6,25 1 6,25 7 NN 16 0 0 0 0 1 6,25 0 0 8 VL 16 0 0 1 6,25 0 0 0 0 9 VP 16 0 0 0 0 1 6,25 1 6,25 10 CT 16 1 6,25 1 6,25 1 6,25 0 0 11 VT 16 1 6,25 2 12.50 1 6,25 1 6,25 12 HN 16 1 6,25 1 6,25 0 6,25 0 0 13 NM 16 2 12,50 1 6,25 1 6,25 0 0 Tớnh chung 208 11 5,28 10 4,80 11 6,25 6 6,25
3.9. Giỏm ủịnh ủặc tớnh sinh học của cỏc chủng E.coli, Aeromonas spp và
Salmonella spp phõn lập ủược
Từ những chủng vi khuẩn E.col,. Aerornonas spp và Salmonella spp phõn lập
ủược từ thịt cỏ rụ phi, ủó tiến hành giỏm ủịnh một số ủặc tớnh sinh vật học. Kết quả
thu ủược trỡnh bày ở bảng 3.9.
Bảng 3. 9. Kết quả giỏm ủịnh một sốủặc tớnh sinh học của cỏc chủng vi khuẩn E.coli, Aeromonas spp và Salmonella spp phõn lập ủược
(Y/Y/H2S-LG+: vàng, Vàng, H2S õm tớnh, sinh hơi; R/Y/H2S-/G+:ủỏ, vàng, H2S õm tớnh, sinh hơi; R/Y/B2S+/G+: ủỏ. vàng, H2S duong tớnh, sinh hơi)
Kết quả giỏm ủịnh
ủặc tớnh sinh vật hoỏ học Cỏc phản ứng sinh hoỏ
E.coli Aeromonas spp Samonella spp
Số lượng chủng thử nghiệm 36 29 30 Tớnh chất nhuộm Gram - - - Di ủộng + + + Phản ứng oxidase - + - Phản ứng catalase + + + Khả năng dung huyết ổa ổb -
Lờn men glucose, sinh hơi + + +
Lờn men lactose + - -
Phõn giải citrate - + +
Sản sinh urease - - -
Sản sinh indole + + -
đặc ủiểm sản sinh H2S
trờn thạch nghiờng Kligler agar
Y/Y/H2S- G+
Y/Y/H2S+G+ Y/Y/H2S+G+
ổa: Cú 31,2% chủng gõy dung huyết trờn thạch mỏu thỏ 5%
ổb: Cú 71,2% chủng gõy dung huyết trờn thạch mỏu thỏ 5%
+: Dương tớnh - : Âm tớnh Y: Vàng G: Sinh hơi
Từ bảng 3.9, cỏc kết quả thu ủược cho thấy: Cỏc chủng vi khuẩn E.coli, Aeromonas spp và Salmonella spp phõn lập ủược ủều cú cỏc ủặc tớnh sinh vật học như ủó mụ tả trong cỏc tài liệu kinh ủiển (Bergey's Manual of Bacteria) và tài liệu của Nguyễn Như Thanh và cs (2001) [22], đào Trọng đạt (1999) [5], Wilcock và Schwartz (1992), Quinn và Carter (1994) [69].
Sau khi tiến hành phản ứng nhuộm gram và quan sỏt dưới kớnh hiển vi, ủều thấy vi khuẩn Salmonella spp, E.coli và Aeromonas spp bắt mầu gram õm với 100% mẫu phõn lập ủược, khả năng di ủộng là 100%.