- Mẫu nước sử dụng tại các cơ sở giết mổ
2.3.5.Phương pháp ựịnh lượng vi khuẩn E.coli:
Cấy một lượng mẫu thử xác ựịnh hoặc một lượng xác ựịnh huyền phù ban ựầu lên các ựĩa kép chứa môi trường trypton-mật-glucuronic (TBX)
Sử dụng các dung dịch pha loãng thập phân của mẫu thử hoặc của huyền phù ban ựầu cấy vào hai ựĩa cho mỗi dung dịch pha loãng, trong cùng một ựiều kiện.
Các ựĩa này ựược ủ ở 440 C trong 18 giờ ựến 24 giờ rồi kiểm tra ựể phát hiện sự có mặt của các khuẩn lạc ựặc trưng mà ựược gọi là E. coli dương tắnh β-glucuronidaza.
Số lượng ựơn vị hình thành khuẩn lạc của E. coli dương tắnh β- glucuronidaza trên gam hoặc trên ml mẫu ựược tắnh.
+ Sơ ựồ phân lập, giám ựịnh:
Cho 25gam thịt lợn cho vào túi ựựng mẫu
Thêm 225ml dung dịch ựệm pepton Water ở nhiệt ựộ phòng
Lấy 1ml từ túi pha loãng thành 10-2 ựến 10-3
Chuyển 1ml từ mỗi nồng ựộ pha loãng vào ựĩa lồng (2 ựĩa/nồng ựộ)
đổ thạch TBX (15-20ml) vào mỗi ựĩa (TBX ựể ở 440 ựến 470C)
đợi thạch ựông lại, lật ngược các ựĩa
đem vào tủ ấm nuôi cấy ở 440C trong vòng 18 - 24 giờ
đọc kết quả + Biểu thị kết quả:
đếm các khuẩn lạc ựiển hình trên ắt nhất một ựĩa chứa ắt nhất 15 khuẩn lạc xanh ựiển hình.
Trường đại Học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp 29 Tắnh số lượng CFU của E. coli dương tắnh β-glucuronidaza có mặt trong mẫu thử trên ml hoặc gam sản phẩm từ hai ựộ pha loãng liên tiếp
N= + ừ ừ ∑ 2 1 0,1n n d V a Trong ựó
∑a là tổng số các khuẩn lạc ựếm ựược trên tất cả các ựĩa ựược giữ lại sau hai ựộ pha loãng liên tiếp có ắt nhất một ựĩa chứa tối thiểu 15 khuẩn lạc màu xanh ựiển hình.
n1 là số ựĩa giữ lại tại ựộ pha loãng thứ nhất n2 là số ựĩa giữ lại tại ựộ pha loãng thứ hai
V thể tắch dịch cấy ựã dùng trên mỗi ựĩa tắnh bằng ml d hệ số pha loãng tương ứng với ựộ pha loãng thứ nhất